大豆及蕓豆高效根瘤菌的分子標(biāo)記研究.pdf

1、本研究針對(duì)本室前期篩選到的高效大豆和蕓豆根瘤菌進(jìn)行分子標(biāo)記研究。 首先確定供試菌株的分類學(xué)地位。通過(guò)16SrDNA-RFLP、IGS-RFLP和16SrDNA全序列測(cè)定等方法最終將CCBAU01287歸為中華根瘤菌屬，其分類地位與費(fèi)氏根瘤菌最近；將CCBAU65121歸為根瘤菌屬，其分類地位與菜豆根瘤菌最近。 采用三親本雜交的方法，將綠色熒光蛋白基因(gfp)轉(zhuǎn)入高效、抗逆、廣適應(yīng)性的快生大豆根瘤菌CCBAU0128

2、7和菜豆根瘤菌CCBAU65121中；將發(fā)光酶基因(luxAB)轉(zhuǎn)入CCBAU01287中，獲得分別含gfp和luxAB基因的轉(zhuǎn)基因菌株CCBAU01287(G)、CCBAU65121(G)和CCBAU01287(L)。平板傳代和共生檢測(cè)表明：外源質(zhì)粒在宿主菌中均能夠自我復(fù)制，穩(wěn)定遺傳。通過(guò)對(duì)植株生物量的測(cè)定，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明綠色熒光蛋白基因(gfp)和發(fā)光酶基因(luxAB)標(biāo)記的菌株CCBAU01287(G)和CCBAU01287(

3、L)對(duì)大豆的生長(zhǎng)及生物量的積累均與出發(fā)菌株的效果無(wú)顯著差異。兩個(gè)轉(zhuǎn)基因菌株為今后CCBAU01287和CCBAU65121菌劑的推廣提供了重要支持。 進(jìn)一步研究證明，gfp標(biāo)記菌CCBAU01287(G)可用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)根瘤菌在大豆根部的早期定殖情況和測(cè)定根瘤菌在根表的定殖密度；luxAB標(biāo)記菌CCBAU01287(L)可以用于檢測(cè)根瘤菌在土壤回接實(shí)驗(yàn)中的占瘤率。 為保證高效菌株在生產(chǎn)應(yīng)用中能夠具有較高的穩(wěn)定性，采用草