特定理化因子對骨骼肌肌質(zhì)網(wǎng)囊泡氧化還原系統(tǒng)的影響研究.pdf

1、本文以提取的兔骨骼肌肌質(zhì)網(wǎng)(SR)囊泡為研究對象，探討兩種特定的理化因子(50Hz0.4mT磁場和Na+、K+生理鹽離子)對SR囊泡自由基產(chǎn)生機(jī)制的調(diào)控作用及其對SR上鈣釋放通道(ryanodinereceptor，RyR1)的影響，并初步考察氧化還原系統(tǒng)在SR囊泡上的具體活性位點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)采用熒光分光光度計(jì)、紫外—可見分光光度計(jì)檢測兩種理化因子對SR上NADH氧化酶(NOX)活性以及伴生超氧自由基(O2-)產(chǎn)率的影響；采用[3

2、H]-ryanodine結(jié)合實(shí)驗(yàn)、鈣釋放動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測兩種理化因子對SR上RyR1功能狀態(tài)的影響；利用去垢劑的作用確定NOX在SR上的位置。 結(jié)果顯示，高濃度的Na+、K+對SR上NOX活性(由NADH的氧化初速率表征)以及伴生的O2-產(chǎn)率均有抑制作用；在[3H]-ryanodine結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，高濃度的Na+、K+也抑制了由NADH誘導(dǎo)的ryanodine與RyR1結(jié)合的升高趨勢；在鈣釋放動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，不同濃度的K+調(diào)控了由N

3、ADH誘導(dǎo)的Ca2+釋放初速率變化；NOX活性以及O2-產(chǎn)率與RyR開放程度存在正相關(guān)關(guān)系。同樣，50Hz0.4mT磁場輻照30min，有效地促進(jìn)了NADH的氧化以及O2-的產(chǎn)生，由NADH誘導(dǎo)的受配體的結(jié)合能力以及RyR1的Ca2+釋放速率也在磁場作用下得以相應(yīng)提高。而去垢劑作用使外源的NADH迅速進(jìn)入SR囊泡膜內(nèi)，不與膜外的NOX產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)。 由此猜測，骨骼肌肌質(zhì)網(wǎng)囊泡上存在具有對特定理化因子敏感并中介超氧自由基產(chǎn)生