雌性大鼠高齡生育對子代發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能力的影響.pdf

1、隨著社會發(fā)展，社會與經(jīng)濟(jì)壓力的增加，人們婚育觀念逐漸發(fā)生改變，使高齡生育呈逐年增加的趨勢。尤其是2016年我國二胎政策的全面實施，可以預(yù)見在未來的幾年內(nèi)我國將會呈現(xiàn)高齡生育的高峰。目前，高齡生育對子代的生長和發(fā)育的影響尚無定論。一些流行病學(xué)證據(jù)表明高齡生育對子代有負(fù)面影響，子代患唐氏綜合征、精神障礙等疾病的風(fēng)險更高。也有流行病學(xué)研究則提出了不同的看法，認(rèn)為高齡生育和子女的神經(jīng)發(fā)育和智力之間相關(guān)。為了探討高齡生育對子代生長發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能

2、力的影響，我們記錄了高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)，采用Morris水迷宮檢測高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代的空間學(xué)習(xí)和記憶能力，采用HE染色和尼氏染色觀察海馬形態(tài)學(xué)的變化。
　　目的：
　　研究高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代出生后發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)的差異，檢測高齡雌鼠與青年雌鼠子代2月齡學(xué)習(xí)記憶能力的差異及海馬形態(tài)學(xué)的差異。
　　材料與方法：
　　1.實驗動物和分組：清潔級SD大鼠購自鄭州大

3、學(xué)實驗動物中心。將6只3月齡和7只12月齡的雌性大鼠與隨機(jī)選擇的3月齡雄鼠單獨合籠，雌鼠懷孕后將雄鼠拿出，待雌鼠自然分娩。記錄每窩從雌雄合籠至仔鼠出生的天數(shù)。在分娩后24 h內(nèi)記錄每窩產(chǎn)仔數(shù)和雌雄性別比例。根據(jù)12月齡雌鼠的產(chǎn)仔數(shù)和雌雄比例，隨機(jī)選擇3月齡雌鼠所生仔鼠，將多余的仔鼠處死。將12月齡雌鼠所生仔鼠分為高齡生育組，3月齡雌鼠所生仔鼠分為青年生育組。
　　2.生育能力檢測：記錄合籠-分娩天數(shù)、每窩產(chǎn)仔數(shù)量、雌雄比例。

4、>　　3.仔鼠發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)檢測：詳細(xì)記錄仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天的體重，并記錄耳廓分離時間、切齒萌出時間和睜眼時間等。
　　4. Morris水迷宮檢測：將兩組仔鼠飼養(yǎng)至2月齡，采用Morris水迷宮連續(xù)7天對動物進(jìn)行定位航行實驗和空間搜索實驗。
　　5.海馬組織形態(tài)學(xué)檢測：在青年生育組與高齡生育組Morris水迷宮結(jié)束后處死大鼠并取腦組織，放入4％多聚甲醛固定并做石蠟包埋，石蠟連續(xù)冠狀切片進(jìn)行

5、HE染色和尼氏染色，鏡下觀察海馬組織的形態(tài)學(xué)特征。
　　6.統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對于青年生育組和高齡生育組仔鼠出生后的體重變化、Morris水迷宮定位航行實驗逃避潛伏期和游泳距離采用重復(fù)測量設(shè)計資料的單因素方差分析。對于兩組生育能力、發(fā)育指標(biāo)、空間探索實驗平臺穿越次數(shù)和目標(biāo)象限滯留時間百分比的比較，采用兩獨立樣本的t檢驗。檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.生育能力的比較：

6、3月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)為23.17±0.82 d，12月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)為30.93±2.41 d，12月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)顯著長于3月齡雌鼠（P<0.01）。3月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)為13.00±2.61只，12月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)為4.86±1.35只，12月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)顯著少于3月齡雌鼠（P<0.01）。3月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比為47.83±6.27%，12月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比為44.59±14.30%，1

7、2月齡雌鼠與3月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比無顯著差異（P>0.05）。
　　2.仔鼠發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)：在兩組仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天記錄兩組仔鼠的體重。各組每一時間點的體重均比前一時間點增加（P<0.01）。時間因素即體重增重天數(shù)的作用不隨分組的不同而有不同（P>0.05）。青年生育組和高齡生育組兩組隨時間變化的趨勢大致相同，青年生育組和高齡生育組之間不同時間點體重的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。青

8、年生育組仔鼠耳廓分離時間為3.57±0.31 d，高齡生育組仔鼠耳廓分離時間為3.66±0.29 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。青年生育組切齒萌出時間為8.22±0.57 d，高齡生育組為8.43±0.59 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。青年生育組睜眼時間為15.90±0.97 d，高齡生育組為16.18±0.55 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。
　　3. Morris水迷宮結(jié)果：水迷宮測試開始前一天測量兩

9、組動物體重，高齡生育組與青年生育組大鼠體重并無顯著差異（P>0.05）。
　　定位航行實驗：經(jīng)過連續(xù)6天的訓(xùn)練，兩組的逃避潛伏期均顯著縮短（P<0.01），但高齡生育組潛伏期較青年生育組下降緩慢，且每日所測潛伏期均顯著長于青年生育組（P<0.01）。定位航行實驗的第1、2、3d高齡生育組尋找隱藏平臺游泳總距離顯著長于青年生育組（P<0.05）。在第4、5、6d高齡生育組和青年生育組大鼠在尋找隱藏平臺時游泳距離的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（

10、P>0.05）。
　　空間搜索實驗：青年生育組在目標(biāo)象限游泳時間占總時間百分比為38.95±1.68％，高齡生育組為28.54±2.41％，高齡生育組在目標(biāo)象限游泳時間顯著少于青年生育組（P<0.05）。青年生育組穿越原平臺位置為3.57±0.32次，高齡生育組為1.74±0.27次，高齡生育組穿越原平臺位置次數(shù)顯著少于青年生育組（P<0.05）。
　　4.海馬組織形態(tài)學(xué)結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示，高齡生育組和青年生育組大鼠海馬

11、組織結(jié)構(gòu)層次清晰完整，顆粒細(xì)胞、錐體細(xì)胞等結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰可見，排列密集而且整齊，層次緊密，胞核大而圓，細(xì)胞膜完整，胞核居中清楚，細(xì)胞數(shù)量多而清晰，細(xì)胞周圍間隙緊密無水腫；青年生育組和高齡生育組組間無明顯差異。尼氏染色顯示，高齡生育組和青年生育組海馬 CA1、CA3區(qū)錐體細(xì)胞層細(xì)胞排列整齊緊密，呈錐體狀、圓球狀，胞質(zhì)呈深藍(lán)色，細(xì)胞數(shù)量多而密集；細(xì)胞核大而圓，位于中央，胞質(zhì)內(nèi)可見深藍(lán)色顆粒狀或斑塊狀尼氏體；高齡生育組和青年生育組組間無明