在經(jīng)過改進(jìn)的新型制備型自由流電泳裝置中以豬心為原料制備高質(zhì)量的細(xì)胞色素C.pdf

1、在生物分析中為了獲得精確、無相互作用干擾的分析結(jié)果，對(duì)目標(biāo)樣本的進(jìn)行純化是很關(guān)鍵的一步。在過去的幾十年中，為了實(shí)現(xiàn)這一關(guān)鍵步奏，大量研究者為了開發(fā)出創(chuàng)新的操作簡單、穩(wěn)定和廉價(jià)的純化技術(shù)已經(jīng)進(jìn)行了許多努力。作為一種無載體電泳技術(shù)，自由流電泳（FFE）已被應(yīng)用于多種生物樣品的分離純化，如蛋白質(zhì)、細(xì)胞以及細(xì)胞器等。FFE的無載體基質(zhì)的特征使它在分離純化生物樣品上具有非常獨(dú)特的優(yōu)勢：（1）樣品回收率高；（2）保持樣品生物活性；（3）連續(xù)分離；（

2、4）低成本。
　　根據(jù)分離腔的尺寸，可以將 FFE設(shè)備分為兩種類型，即大型制備型自由流電泳（LS-FFE）和微型自由流電泳（μ-FFE）。LS-FFE由于其高通量和連續(xù)分離特性，在大量樣品制備方面具有很大潛力，而μ-FFE由于其樣本需求量小、省時(shí)等優(yōu)點(diǎn)，通常被用于少量樣品的分析檢測。長期以來LS-FFE都被作為一種功能強(qiáng)大的分離純化工具，但是LS-FFE仍舊沒有被廣泛用于生物樣品的純化制備。出現(xiàn)這種情況可能是由以下三個(gè)問題：（1）

3、LS-FFE裝置的使用操作很麻煩；（2）LS-FFE裝置散熱不理想，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差；（3）對(duì)于特定的生物樣本，制定有針對(duì)性的分離方法和實(shí)驗(yàn)條件很困難。
　　本實(shí)驗(yàn)課題中的試驗(yàn)共分為三個(gè)部分，第一部分是為分離腔重新設(shè)計(jì)了新的平行排列的電導(dǎo)膜，取代舊的設(shè)計(jì)中環(huán)形電導(dǎo)膜設(shè)計(jì)方案。這一全新的設(shè)計(jì)改變是本文的一大亮點(diǎn)，為我們的自由流電泳裝置在散熱及溫度控制方面帶來了巨大的性能提升，提升了設(shè)備可運(yùn)行最高電壓的上限，并且同時(shí)實(shí)現(xiàn)良好的溫度控制。第

4、二部分是針對(duì)使用自由流電泳來進(jìn)行細(xì)胞色素 C制備而進(jìn)行的有針對(duì)性的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化。我們?cè)诟倪M(jìn)的裝置上通過模擬三種模式蛋白在不同緩沖液條件下的荷質(zhì)比信息優(yōu)化了 FFE載液的pH及緩沖系統(tǒng)。這里首次采用CLC Protein Workbench5.0(CLC bio)軟件來實(shí)現(xiàn)模擬模式蛋白在不同緩沖液pH條件下的荷質(zhì)比來指導(dǎo) FFE分離。這一軟件的應(yīng)用是本文的另一大亮點(diǎn)。第三部分是從是從天然組織中提取細(xì)胞色素 C的實(shí)際應(yīng)用?；谝陨蟽刹糠?，從