Sox30基因在肺癌和結直腸癌中的甲基化與表達分析.pdf

1、背景:
　　肺癌是嚴重威脅著人類健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在世界絕大部分地區(qū)的腫瘤性疾病中均排在第一位。結直腸癌作為最常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率位居全球惡性腫瘤的第三位，在我國結直腸癌的病死率位居惡性腫瘤死亡率的第五位，并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。肺癌和結直腸癌的發(fā)生發(fā)展涉及了遺傳學和表觀遺傳學等異常變化并逐漸積累的復雜過程，近些年來的研究發(fā)現，表觀遺傳學已經成為肺癌和結直腸癌發(fā)病機制之一，受到了廣泛的關注和重視，其中

2、DNA甲基化作為表觀遺傳學中重要的調控機制，在基因的異常表達和腫瘤發(fā)生中起著重要作用。
　　Sox30(SRY-box containing gene30)作為SOX轉錄因子超家族中的一員，與該家族的其他基因相同，都含有一個典型的HMG-box DNA結合區(qū)域，這無疑提示Sox30基因作為轉錄因子可能對其他基因具有非常重要的調控作用。多年研究表明，Sox30在性腺發(fā)育、精原細胞分化和精子形成中具有重要作用。最近我們研究首次發(fā)現，S

3、ox30在肺癌中是一個新的腫瘤抑制基因，作用機制是Sox30轉錄激活p53及其通路活性，促進腫瘤細胞凋亡。然而，Sox30基因在肺癌和結直腸癌中的表觀遺傳學變化和表達之間的關系以及與結直腸癌、肺癌發(fā)生存在的關系報道尚少。
　　目的:
　　1、檢測Sox30基因在肺癌和結直腸癌細胞系中的甲基化和表達情況。
　　2、檢測Sox30基因在肺癌組織及癌旁組織中的甲基化和表達的發(fā)生情況，同時檢測Sox30基因在結直腸癌組織及癌旁

4、組織中甲基化的發(fā)生情況，并分析它們與病人臨床病理資料之間的聯系。
　　方法:
　　1、利用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR，MSP)檢測肺癌和結直腸癌細胞系以及組織標本DNA中Sox30基因的甲基化情況。采用亞硫酸氫鹽修飾后測序法(bisulfite sequencing PCR，BSP)進一步驗證Sox30的MSP分析結果。
　　2、通過RT-PCR檢測肺癌與結直腸癌細胞系和在甲基

5、化轉移酶抑制劑5-aza-CdR處理前后Sox30基因mRNA水平的表達情況。
　　3、利用免疫組織化學方法檢測Sox30基因在肺癌組織樣本及相應癌旁組織樣本中的表達。
　　4、通過統(tǒng)計學方法，對Sox30基因在肺癌中發(fā)生甲基化及表達的情況和結直腸癌中甲基化的情況與患者臨床病理資料以及預后情況之間存在的關系進行分析。
　　結果:
　　1、本課題選用了8株肺癌細胞系:95D、H1395、H358、H1975、LTE

6、P、H1650、A549和SPC-A和3株結直腸癌細胞系:HCT8、HCT116和SW480。在mRNA水平，Sox30基因在肺癌細胞系A549、H1395、H358和LTEP中無表達，在SPC-A、H1975、95D、H1650中為弱表達，在結直腸癌細胞系三株細胞中均為弱表達;MSP結果顯示，HCT116、A549、H1395、H1975、95D、H1650和LTEP中的Sox30為完全甲基化，HCT8、SW480、SPC-A和H35

7、8為部分甲基化。通過5-Aza-CdR處理72小時后，HCT116、A549、H1395、H1975、95D、H1650和LTEP中Sox30均恢復表達，HCT8、SW480、SPC-A和H358中Sox30表達均上調，說明Sox30基因甲基化直接調控其表達。
　　2、在90例肺癌組織標本中，62例發(fā)生了甲基化(68.9％)，而12例癌旁組織標本中僅1例發(fā)生甲基化(8.3％)。在54例結直腸癌組織標本中，43例發(fā)生了甲基化(79.

8、6％)，而10例癌旁組織標本中僅2例發(fā)生甲基化(20％)。對133例肺癌組織標本和10例癌旁組織標本進行免疫組化染色結果提示，Sox30基因在肺癌標本中表達的平均值為5.36，癌旁標本中表達的平均值為9.67，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.0S)。
　　3、對臨床病理分型等特征與Sox30基因甲基化之間的關系進行了分析，結果表明:在肺癌中，Sox30基因甲基化發(fā)生與性別、年齡、組織類型和病理分級等無明顯的相關性(p＞0.05)，但與

9、肺癌臨床分期明顯相關(p＜0.05);在結直腸癌中，以性別、年齡、吸煙與否、TNM分期和Ducks分期進行分組，兩組間Sox30基因甲基化發(fā)生率無明顯的相關性(p＞0.05)。
　　4、我們對Sox30基因表達與臨床病理特征也進行了相關性分析，結果表明，在肺癌中，Sox30基因表達與肺癌患者的性別、病理分級、年齡、淋巴結有無轉移、腫瘤大小和臨床分期無顯著差異(p＞0.05)。
　　5、Sox30基因的表達與患者預后之間的關系

10、。通過單因素分析和多因素分析所得結果表明，在肺腫瘤中，單因素分析的結果顯示Sox30基因的高表達與患者良好預后具有顯著的相關性，多因素分析的結果表明Sox30基因的表達是一個獨立的預后因素。
　　結論:
　　Sox30基因在肺癌和結直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中通過高甲基化導致表達下調或者失活，從而參與了肺癌和結直腸癌的發(fā)生發(fā)展;Sox30基因表達與肺癌患者預后正相關;Sox30甲基化可以作為肺癌和結直腸癌的一個潛在的標記物。本課題