檢測糞便中基因甲基化在結直腸癌篩查、診斷中的作用.pdf

1、研究目的：研究用甲基化特異性PCR(MS-PCR)法檢測CRC、結直腸息肉、正常人糞便DNA中MAL、CDKNA2A、MGMT基因啟動子甲基化情況對結直腸腫瘤的篩查作用及相關基因高甲基化與結直腸癌臨床病理特征的關系。同時評價試劑盒法對糞便DNA的提取純化作用。 研究方法：收集2008年9月至2009年1月期間在長海醫(yī)院普二科住院的結直腸癌、結直腸息肉及正常對照病人的糞便標本，并整理記錄病例的臨床病理資料，采用糞便細胞DNA提取試

2、劑盒提取糞便DNA并在驗證人基因組DNA存在后，使用MSP檢測糞便DNA中相關基因啟動子甲基化情況。 結果：共提取糞便DNA144例，最終驗證存在人基因組DNA并完成MSP144例，其中CRC組、結直腸息肉組和正常對照組各為69例，49例和26例。CRC患者糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為78.3％、52.3％、55.1％，特異性分別為72％、84％、85.3％，92.7％的CRC患者糞便中至少有一

3、個基因可以檢測到高甲基化，特異性62.6％；進展期腺瘤(＞1cm、伴有上皮內瘤變、絨毛狀腺瘤或管狀絨毛狀腺瘤)患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為72.7％、54.5％、45.5％，81.8％的進展期腺瘤患者糞便中至少有一個基因可以檢測到高甲基化；非進展期腺瘤患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為46.2％、30.8％、30.8％，61.5％的非進展期腺瘤患者糞便中至少有

4、一個基因可以檢測到高甲基化；鋸齒狀腺瘤(本院病理科診斷名稱為混合型增生性腺瘤性息肉)患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為50.0％、16.7％、33.3％，66.7％的鋸齒狀腺瘤患者糞便中至少有一個基因可以檢測到高甲基化：增生性息肉患者糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為26.3％、15.8％、10.5％，42.1％的增生性息肉患者糞便中至少有一個基因可以檢測到高甲基化；正常對

5、照患者糞便糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動子甲基化率為3.8％、0％、3.8％，分別在正常對照組中檢測到1例MAL和MGMT高甲基化。檢測糞便中MAL、CDKN2A、MGMT基因甲基化對于Ⅰ-Ⅱ期結直腸癌和癌前病變(進展期腺瘤)的發(fā)現率分別為73.8％、54.8％、52.496，聯合檢測3個基因甲基化對Ⅰ-Ⅱ期結直腸癌和癌前病變(進展期腺瘤)的發(fā)現率88.1％。結直腸癌糞便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因啟動

6、子甲基化與結直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期均無相關性。 結論：試劑盒法提取純化糞便DNA可靠性高。糞便DNA中MAL、CDKN2A和MGMT基因啟動子甲基化情況與結直腸癌患者性別、年齡、腫瘤部位、TNM分期、淋巴結轉移及遠處轉移無關。用MSP法檢測糞便中MAL、CDKN2A和MGMT基因啟動子甲基化是檢測早期CRC及癌前病變結直腸癌篩查的無創(chuàng)的高敏感性方法，聯合分析MAL、CDKN2A和MGM