糞便DNA中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化在結(jié)直腸癌診斷中的作用.pdf

1、研究背景：結(jié)直腸癌(CRC)近十年來(lái)發(fā)病率不斷升高,在男女性惡性腫瘤死因中都居于前列,相應(yīng)治療費(fèi)用也在不斷增加。作為一種可以根治的疾病,早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷是CRC能否治愈的關(guān)鍵。所以對(duì)普通人群展開(kāi)CRC的診斷篩查有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但當(dāng)前常用的診斷篩查方法,結(jié)腸鏡檢查,糞便隱血試驗(yàn)(FOBT)等并沒(méi)有一種在敏感性、特異性、患者依從性及經(jīng)濟(jì)成本上完全滿(mǎn)足對(duì)于診斷篩查技術(shù)所期望的要求。隨著分子生物學(xué)研究進(jìn)展,方法改進(jìn),對(duì)于CRC,檢測(cè)糞

2、便DNA中相關(guān)改變,作為一種新的無(wú)創(chuàng)檢查手段,被推薦為最適合于CRC普查。而近來(lái)一些探索性研究發(fā)現(xiàn),檢測(cè)糞便DNA中基因啟動(dòng)子甲基化情況用于CRC篩查,可以獲得比以往檢測(cè)基因突變更好的效果。分泌型卷曲相關(guān)蛋白1基因(sFRP1)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抑癌基因,其編碼的蛋白對(duì)Wnt通路的激活有拮抗作用,而Wnt通路的持續(xù)激活是大部分CRC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中非常重要的分子事件。在對(duì)結(jié)直腸腫瘤組織的研究中發(fā)現(xiàn),sFRP1基因突變罕見(jiàn),但其啟動(dòng)子區(qū)CpG

3、島發(fā)生異常甲基化的頻率很高,并且這種異常甲基化與sFRP1基因的表達(dá)下降相關(guān)。sFRP1基因在結(jié)直腸腫瘤中所表現(xiàn)出的這種特點(diǎn),使其啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)成為一個(gè)非常有希望的糞便DNA篩查標(biāo)志。 研究目的：研究糞便DNA中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化情況對(duì)結(jié)直腸癌的診斷作用及該基因甲基化與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系,同時(shí)評(píng)價(jià)試劑盒法對(duì)糞便DNA的提取純化作用。 研究方法：收集2007年6月至2008年2月期間在長(zhǎng)海醫(yī)院普二科住院的

4、結(jié)直腸癌、結(jié)直腸息肉及正常對(duì)照病人的糞便標(biāo)本,并整理記錄病例的臨床病理資料,采用糞便細(xì)胞DNA提取試劑盒提取糞便DNA并在驗(yàn)證人基因組DNA存在后,使用甲基化特異性PCR(MS-PCR)檢測(cè)糞便DNA中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化情況。 結(jié)果：共提取糞便DNA 55例,最終驗(yàn)證存在人基因組DNA并完成Ms-PCR 45例,其中CRC組、結(jié)直腸息肉組和正常對(duì)照組各為21例,15例和9例。CRC組和結(jié)直腸息肉組中糞便DNA sFRP1

5、基因啟動(dòng)子甲基化情況分別為66.7％(14/21)和46.7％(7/15),正常對(duì)照組中無(wú)甲基化出現(xiàn)。CRC組和結(jié)直腸息肉組與正常對(duì)照組甲基化情況差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但兩者之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)中糞便DNA檢測(cè)sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化診斷篩查結(jié)直腸癌敏感性為66.7％,特異性為70.8％,對(duì)于結(jié)直腸癌及癌前病變(癌前病變包括存在異型增生,息肉>1cm,管狀絨毛狀腺瘤)的診斷敏感性為65.5％,特異性為87.5％。結(jié)直腸癌患者

6、中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化情況與患者的年齡,性別,病變部位,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均無(wú)關(guān)。 結(jié)論：試劑盒提取純化糞便DNA可靠度較高,但糞便DNA量仍然受標(biāo)本本身特性影響。檢測(cè)糞便DNA中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化用于結(jié)直腸癌診斷可以獲得較高的敏感性,對(duì)于癌前病變發(fā)現(xiàn)率也較高,但特異性不佳,不能很好區(qū)分癌與腺瘤。sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化情況與結(jié)直腸癌各臨床病理特征間無(wú)關(guān)聯(lián)。檢測(cè)糞便DNA中sFRP1基因啟動(dòng)子甲基化情況是很有