miR34b-c甲基化及其在結(jié)直腸癌早期診斷中的意義.pdf

1、背景：
　　隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、社會的進(jìn)步、人民生活水平的提高,行為生活方式的改變、以及人口老齡化等原因,我國人口的死因譜已發(fā)生了很大變化,腫瘤是威脅人類健康的重大疾患,其中2002年全球結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)新病例占全部癌癥的9.4％,發(fā)病率男性已躍居第4位,女性第3位。根據(jù)2005年對全國十分之一的人口進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn),新增的結(jié)直腸癌患者發(fā)病率以每年3.9%的速度在遞增,而世界平均水平則只是2%的增

2、速。據(jù)不完全統(tǒng)計,2005年我國結(jié)直腸癌發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)分別是17.2萬和9.9萬,已超過美國[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)西方發(fā)達(dá)國家結(jié)直腸癌發(fā)病率有下降趨勢,說明這與癌癥的早期診斷及癌前預(yù)防有很大關(guān)系。早期結(jié)直腸癌多無不適癥狀,早期得到確診的只有5%,60-70%的結(jié)直腸癌就診時已是中晚期,結(jié)直腸癌根治術(shù)后的5年生存率僅為50.21%,術(shù)后復(fù)發(fā)率30%[2]。因此,早期診斷是提高臨床治愈率的關(guān)鍵。然而,到目前為止尚無理想的早期篩查或診斷結(jié)直腸

3、癌的非侵入性手段。近年來研究認(rèn)為miRNAs通過對多種基因的調(diào)節(jié)廣泛參與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,還發(fā)現(xiàn)大約50%的miRNAs基因組富含CpG序列,是表觀遺傳沉默的重要靶點(diǎn)。前期研究表明:在結(jié)直腸癌中,miR34b/c存在高頻率的甲基化異常,是結(jié)直腸癌的一重要分子特征。結(jié)直腸癌脫落的癌細(xì)胞或分泌的游離DNA通過糞便排出體外,糞便DNA中也存在較高比例的腫瘤DNA。因此,檢測糞便miR34b/c基因甲基化有可能成為新的結(jié)直腸癌早期診斷或篩查

4、的生物標(biāo)志物。本文采用多重置換擴(kuò)增(Multiple displacement amplification,MDA)技術(shù)聯(lián)合甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技術(shù)分析了126例結(jié)直腸癌患者糞便miR-34b/c基因甲基化狀態(tài),以探討其在結(jié)直腸癌早期診斷中的應(yīng)用價值。
　　目的：
　　探討糞便miR34b/c甲基化狀態(tài)的檢測在結(jié)直腸癌早期診斷中的意義。
　　方法：
　　從

5、126例結(jié)直腸癌患者癌組織、癌旁組織、糞便和64例正常對照者的糞便中分別提取DNA,采用多重置換擴(kuò)增(Multiple displacement amplification,MDA)技術(shù)對經(jīng)過亞硫酸氫鹽修飾樣本進(jìn)行全基因組擴(kuò)增,結(jié)合甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)檢測組織和糞便中miR34b/c基因甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果：
　　1、結(jié)直腸癌癌組織miR34b/c基因的甲基化陽性率

6、為95.2%(120/126),對應(yīng)的癌旁正常組織為11.9%(15/126),兩者比較有顯著差異(P<0.01);
　　2、結(jié)直腸癌糞便miR34b/c甲基化陽性率為90.2%(111/123),顯著高于正常對照7.8%(5/64),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。糞便DNAmiR34b/c用于結(jié)直腸癌早期診斷的敏感性為90.2%,特異性為92.2%。
　　3、miR34b/c甲基化狀態(tài)與各臨床病理參數(shù)無顯著相關(guān)(P>0