血清鈣、鎂測(cè)定偏倚的評(píng)價(jià)和制備物互通性的研究及同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定血清鈣方法的建立.pdf

1、本文從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 血清鈣、鎂測(cè)量偏倚的評(píng)價(jià)和制備物互通性的研究
　　研究目的：
　　評(píng)價(jià)血清鈣、鎂常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)（方法）的正確性，為我國(guó)臨床檢驗(yàn)血清鈣、鎂檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化提供科學(xué)依據(jù);研究參考物質(zhì)及相關(guān)制備物的互通性，為我國(guó)室間質(zhì)評(píng)及標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃遴選合適的參考物質(zhì)和材料。
　　研究方法：
　　本研究采用的比對(duì)方法為我室建立的電感耦合等離子體質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)法，待評(píng)價(jià)方法分別為14和12個(gè)品牌的常規(guī)血

2、清鈣、鎂檢測(cè)試劑盒及其配套校準(zhǔn)品在日立7180生化分析儀上組成的常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)。參考EP9-A2推薦的濃度范圍，分別收集48(鈣)和45（鎂）份單人份新鮮病人血清樣本，作為比對(duì)實(shí)驗(yàn)的樣本。25種待評(píng)價(jià)互通性的物質(zhì)為:(1)新鮮冰凍混合人血清(HSP)，由剩余血清匯集加工制成;(2)血清有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);(3)動(dòng)物血清;(4)常規(guī)生化室間質(zhì)評(píng)物質(zhì);(5)水溶液，為實(shí)驗(yàn)室自制候選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);(6)常規(guī)方法校準(zhǔn)品。
　　以比對(duì)方法測(cè)定48或45

3、份新鮮病人血清樣本的結(jié)果為x軸，以各常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果為Y軸，做散點(diǎn)圖，并進(jìn)行簡(jiǎn)單直線回歸(OLR)分析;利用擬合的直線方程，計(jì)算各常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平上的預(yù)期偏倚(Bias)。分別采用根據(jù)生物學(xué)變異導(dǎo)出的性能規(guī)范的要求、衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《臨床化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)(WS/T403-2012)》的允許偏倚、以及美國(guó)CLI'A88允許總誤差的1/2作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)偏倚進(jìn)行評(píng)價(jià)。計(jì)算Y值的雙側(cè)95％預(yù)測(cè)區(qū)間，同時(shí)將待評(píng)價(jià)物質(zhì)的

4、測(cè)定結(jié)果加入該散點(diǎn)圖中，根據(jù)其點(diǎn)是否落在回歸直線的95％預(yù)測(cè)區(qū)間內(nèi)，以評(píng)價(jià)其互通性。
　　研究結(jié)果：
　　對(duì)于血清鈣檢測(cè)，14種常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)的精密度較好（實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV＜2.26％），各系統(tǒng)與比對(duì)方法的相關(guān)系數(shù)較高（相關(guān)系數(shù)r＞0.99）?；ネㄐ栽u(píng)價(jià)結(jié)果表明，25種待評(píng)價(jià)物質(zhì)中，2013年室間質(zhì)評(píng)樣本在部分系統(tǒng)表現(xiàn)出負(fù)基質(zhì)效應(yīng)，2014年室間質(zhì)評(píng)樣本在部分系統(tǒng)表現(xiàn)出正基質(zhì)效應(yīng)?；旌先搜宓幕ネㄐ暂^好，僅在個(gè)別系統(tǒng)表現(xiàn)出負(fù)基質(zhì)效

5、應(yīng)。四種常規(guī)方法校準(zhǔn)品在部分系統(tǒng)存在基質(zhì)效應(yīng)。三種血清有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的互通性較好，僅GBW09152在一個(gè)系統(tǒng)表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng)。動(dòng)物血清在部分系統(tǒng)存在基質(zhì)效應(yīng)。水溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在多數(shù)系統(tǒng)存在基質(zhì)效應(yīng)，其基質(zhì)相關(guān)偏倚較大，僅可用于參考方法的校準(zhǔn)或正確度驗(yàn)證。
　　血清鈣檢測(cè)，14種常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定48份新鮮冰凍血清鈣的平均偏倚范圍為-0.129mmol/L～-0.001 mmol/L(-5.61％～-0.01％)，在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平(1.

6、75mmol/L、2.74mmol/L、3.37mmol/L)的預(yù)期偏倚范圍分別為-0.108mmol/L～0.053mmol/L(-6.16％～3.02％)、-0.165mmol/L～-0.001 mmol/L(-6.02％～-0.04％)、-0.215mmol/L～0.067mmol/L(-6.38％～1.99％)。多數(shù)系統(tǒng)在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚能夠滿足CLI'A88允許總誤差1/2的要求（0.125mmol/L）;半數(shù)系統(tǒng)能夠

7、滿足臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目質(zhì)量指標(biāo)(WS/T403-2012)的允許偏倚2％;僅有少數(shù)系統(tǒng)能夠滿足生物學(xué)變異最低性能規(guī)范的要求1.3％。其中羅氏、九強(qiáng)、邁瑞系統(tǒng)的校準(zhǔn)偏倚較小，測(cè)定結(jié)果的正確度好，其他系統(tǒng)仍存在一定的校準(zhǔn)偏倚。
　　對(duì)于血清鎂檢測(cè)，12種常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)的精密度較好（實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV＜2.01％），各常規(guī)系統(tǒng)與比對(duì)方法的相關(guān)系數(shù)較高（相關(guān)系數(shù)r＞0.99）。2013及2014年室間質(zhì)評(píng)樣本在部分系統(tǒng)表現(xiàn)為正基質(zhì)效應(yīng);混合血清

8、樣本的互通性較好，僅在一個(gè)系統(tǒng)表現(xiàn)出正基質(zhì)效應(yīng);三種血清有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中，僅SRM956 c2在所有的常規(guī)系統(tǒng)中均具有互通性，GBW09152和BCR304均在兩個(gè)系統(tǒng)中表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng);四種常規(guī)方法校準(zhǔn)品均在部分系統(tǒng)表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng);動(dòng)物血清在部分系統(tǒng)表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng);水溶液在多數(shù)系統(tǒng)存在基質(zhì)效應(yīng)，且基質(zhì)相關(guān)偏倚較大。
　　血清鎂檢測(cè)，12種常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定45份新鮮冰凍血清鎂的平均偏倚范圍是-0.040mmol/L～0.063mmol

9、/L(-4.52％～7.20％);在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平(0.60mmol/L、1.00mmol/L、2.50mmol/L)的預(yù)期偏倚范圍分別為-0.026mmol/L～0.059mmol/L(-4.27％～9.30％)、-0.048 mmol/L～0.063 mmol/L(-4.79％～6.31％)、-0.341mmol/L～0.101 mmol/L(-13.66％～4.05％)。多數(shù)系統(tǒng)在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平的偏倚能夠滿足臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)

10、目質(zhì)量指標(biāo)(WS/T403-2012)的允許偏倚5.5％，有半數(shù)系統(tǒng)能夠滿足生物學(xué)變異最低性能規(guī)范的要求2.8％，只有少數(shù)系統(tǒng)能夠滿足適當(dāng)性能規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)1.8％。其中，德賽、和光和邁瑞三個(gè)常規(guī)系統(tǒng)，在三個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚均滿足生物學(xué)變異最低性能規(guī)范的要求2.8％，校準(zhǔn)情況較好，測(cè)定結(jié)果正確度高，其他系統(tǒng)仍存在一定的校準(zhǔn)偏倚。
　　研究結(jié)論：
　　對(duì)于血清鈣、鎂檢測(cè)，多數(shù)常規(guī)系統(tǒng)存在著校準(zhǔn)偏倚，試劑生產(chǎn)廠家應(yīng)關(guān)注校準(zhǔn)品定值

11、的溯源性問題。部分參考物質(zhì)及制備物在常規(guī)系統(tǒng)中表現(xiàn)出基質(zhì)效應(yīng)，在使用這些物質(zhì)時(shí)，應(yīng)對(duì)其互通性問題有明確認(rèn)識(shí)。
　　第二部分 同位素稀釋電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定血清鈣參考方法的建立及參考方法比對(duì)
　　研究目的：建立同位素稀釋電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定血清鈣的參考方法，并確認(rèn)方法的可靠性。利用新建立的同位素稀釋質(zhì)譜法與本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的電感耦合等離子體內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行方法比對(duì)，評(píng)價(jià)兩種不同原理的參考方法是否存在差異。
　　研究方

12、法：建立的同位素稀釋電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)定血清鈣的參考方法，選擇的測(cè)量同位素對(duì)為44Ca/42Ca，以高富集42Ca作為同位素稀釋劑。樣本處理過(guò)程簡(jiǎn)單，采用重量法準(zhǔn)確加入樣本和同位素稀釋劑，采用硝酸直接消解的方式進(jìn)行處理。以氫氣作為反應(yīng)氣的八級(jí)桿碰撞反應(yīng)池，能有效的消除多原子離子干擾，獲得良好的同位素比值測(cè)量精度，RSD＜0.10％(n=10)。以SRM3109a鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液作為校準(zhǔn)液，采用反向同位素稀釋法準(zhǔn)確標(biāo)定42Ca同位素稀釋濃度

13、，同時(shí)通過(guò)測(cè)定天然豐度的鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(即SRM3109a)獲得準(zhǔn)確的質(zhì)量歧視校正因子。樣本分析時(shí)，采用加標(biāo)校準(zhǔn)溶液和加標(biāo)樣本溶液交替測(cè)定的方式，以已知同位素比的加標(biāo)校準(zhǔn)溶液作為標(biāo)準(zhǔn)，采用包括法，使用樣本測(cè)定前后加標(biāo)校準(zhǔn)溶液的測(cè)定結(jié)果計(jì)算質(zhì)量歧視校正因子。這種測(cè)定方式使質(zhì)量歧視效應(yīng)和儀器漂移帶來(lái)的不確定度最小，獲得準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果，樣本測(cè)量結(jié)果的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為0.40％，k=2。該方法儀器背景和樣本處理空白均較低，分別為0.01％～0.0

14、7％，0.02％～0.12％，不需要空白校正。
　　研究結(jié)果：
　　經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的方法確認(rèn)，該方法的精密度較好，測(cè)定2014、2015年電解質(zhì)正確度驗(yàn)證兩個(gè)濃度的樣本，其重復(fù)性（批內(nèi)CV）、期間精密度（批間CV）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV范圍分別是RSD0.12％～0.19％(n=3)，RSD0.07％～0.09％(n=3)，RSD0.16％～0.17％(n=9)。采用SRM909bⅠ、SRM909bⅡ、SRM909c和GBW09152進(jìn)行

15、方法正確度驗(yàn)證，測(cè)定結(jié)果均在認(rèn)定值范圍內(nèi)，4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果均值與靶值的相對(duì)偏倚分別為0.29％，-0.02％，0.10％，-0.19％;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV分別為0.18％，0.18％，0.11％，0.16％，表明方法的正確度和精密度較好。方法回收率為99.87％～100.37％，方法的特異性好。
　　研究結(jié)論：
　　根據(jù)EP9-A2文件，收集46份新鮮血清樣本，用新建立的同位素稀釋質(zhì)譜法和本實(shí)驗(yàn)室已建立的內(nèi)標(biāo)法同時(shí)對(duì)46份血清