大鼠肝再生期間14-3-3基因與糖代謝相關(guān)酶基因的表達.pdf

1、肝再生的研究由來已久，研究肝再生的機理能夠為臨床上肝病的治療提供理論依據(jù)，研究肝再生常用的模型是2/3部分肝切除模型。14-3-3是一種高度保守的蛋白質(zhì)，各亞型具有多種功能，但是這些亞型在大鼠肝再生中的研究還未見報道。肝再生期間糖代謝的變化是肝再生研究中的一項重要內(nèi)容，這些變化可以通過糖代謝某些關(guān)鍵步驟中酶的變化來反映。在增殖的細胞中，14-3-3很可能會通過調(diào)節(jié)糖代謝中一些信號分子而影響這些酶的活性，進而影響肝再生中糖代謝的進程。

2、r>　　實驗?zāi)康氖?，通過研究14-3-3和糖代謝相關(guān)酶對大鼠肝再生過程的影響為進一步探討肝再生的機理提供理論依據(jù)。
　　針對上述目的制定實驗方法。
　　(1)飼喂SD純系大鼠，然后對大鼠實施2/3部分肝切除手術(shù);在部分肝切除手術(shù)后的0h、2h、6h、12h、24h、36h、72h、120h和168h取出大鼠剩余肝臟，并制備待檢樣品。
　　(2)利用大鼠基因組2302.0芯片和聚丙烯酰氨凝膠電泳的方法檢測大鼠肝再生期間1

3、4-3-3的7種亞型的基因表達情況，用Cy3/Cy5的方法分析數(shù)據(jù)，1433的7種亞型是14-3-3β/α、14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3η、14-3-3σ、14-3-3ζ/δ和14-3-3τ/θ。
　　(3)利用RT-PCR的方法檢測大鼠肝再生期間糖代謝相關(guān)酶的基因表達情況，用2-△△ct未配對T檢驗法分析數(shù)據(jù)，糖代謝相關(guān)酶是丙酮酸激酶LR、丙酮酸脫氫酶A、檸檬酸合成酶、乳酸脫氫酶A、乳酸脫氫酶B和葡萄糖6磷酸脫氫

4、酶。
　　最終得到以下實驗結(jié)果。
　　(1)在大鼠部分肝切除手術(shù)后的168h內(nèi)，14-3-3的7種亞型中有4種發(fā)生了表達，分別是14-3-3γ、14-3-3ε、14-3-3σ和14-3-3τ/θ。與0h相比，14-3-3ε在2h的表達明顯下調(diào)(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)，在24h、30h、72h、120h和168h的表達明顯上調(diào)(t=3.871，2.970，2.895，2.970和3.899＞t0.05

5、(4)=2.776，p＜0.05)，14-3-3σ在30h的表達明顯上調(diào)(t=5.750＞t0.01(4)=4.601，p＜0.01)，14-3-3τ/θ在2h、24h、30h和36h的表達明顯上調(diào)(t=3.948，3.660，3.952和2.860＞t0.05(4)=2.776，p＜0.05)。與0h作對比，其余檢測點基因的表達均無明顯差別(t＜t0.05(4)=2.776，p＞0.05)。
　　(2)與0h相比，丙酮酸激酶LR

6、的基因在2h的表達明顯上調(diào)(P＜0.01)，在12h、24h、30h、36h和120h的表達明顯下調(diào)(P＜0.01)，在6h、72h和168h的表達明顯下調(diào)(P＜0.05)，丙酮酸脫氫酶A的基因在6h的表達明顯下調(diào)(P＜0.05)，在12h、30h、36h、72h、120h、和168h的表達明顯下調(diào)(P＜0.01)，檸檬酸合成酶的基因在6h、12h、24h、30h、36h、72h、120h、和168h的表達明顯下調(diào)(P＜0.01)，乳酸

7、脫氫酶A的基因在2h、6h、12h、24h、30h、36h、72h和120h的表達明顯下調(diào)(P＜0.01)，乳酸脫氫酶B的基因在2h處的表達明顯上調(diào)(P＜0.01)，葡萄糖6磷酸脫氫酶的基因在2h的表達明顯下調(diào)，(P＜0.05)，在6h、12h、24h、30h、36h、72h和168h的表達明顯下調(diào)(P＜0.01)，其余檢測點基因的表達均無明顯差別(P＞0.05)。
　　綜上所述得出實驗結(jié)論。
　　(1)在大鼠肝再生過程中，