雷竹14-3-3基因家族克隆和功能分析.pdf

1、14-3-3蛋白是廣泛存在于真核生物中一類高度保守的蛋白,在植物中,14-3-3蛋白調(diào)控一系列生理生化過程。擬南芥中14-3-3蛋白與CO互作調(diào)控光周期途徑從而調(diào)控開花,水稻中14-3-3蛋白與FT互作對(duì)開花起負(fù)調(diào)控作用,因此,14-3-3家族基因的克隆對(duì)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)周期比較長(zhǎng)的竹類植物成花機(jī)理的研究有重要的意義。本研究從雷竹(Phyllostachys violascens)中獲得4個(gè)14-3-3家族基因,進(jìn)行了表達(dá)特性分析,通過轉(zhuǎn)基因?qū)?/p>

2、其進(jìn)行功能分析,探究其蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位;利用酵母雙雜交研究雷竹GF14c蛋白與雷竹FT之間的相互作用,主要的研究結(jié)果如下:
　　1、從雷竹中克隆到4個(gè)14-3-3蛋白同源基因,分別命名PvGF14b、PvGF14c、PvGF14e、PvGF14f,PvGF14b基因組DNA全長(zhǎng)為2160bp,cDNA全長(zhǎng)958bp,包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子,編碼262個(gè)氨基酸殘基。PvGF14c基因組DNA全長(zhǎng)為1935bp, cDNA全長(zhǎng)1

3、086bp,包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子,編碼256個(gè)氨基酸殘基。PvGF14e基因組DNA全長(zhǎng)為2130bp,cDNA全長(zhǎng)882bp,包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子,編碼262個(gè)氨基酸殘基。PvGF14f基因組DNA全長(zhǎng)為2160bp,cDNA全長(zhǎng)1045bp,包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子,編碼261個(gè)氨基酸殘基。
　　2、RT-PCR分析顯示,這4個(gè)基因在開花前后的表達(dá)量沒有差異,且PvGF14c在開花前后的表達(dá)量比其他3個(gè)基因高。P

4、vGF14b、PvGF14c在24小時(shí)內(nèi)均有表達(dá),無晝夜節(jié)律性。PvGF14b在根、莖、花中表達(dá)量稍高,其次是老葉,在幼葉的中表達(dá)量較低;PvGF14 c在葉中表達(dá)量最高,在莖中表達(dá)量微量表達(dá);在根和花中沒有檢測(cè)到表達(dá),PvGF14e在根中表達(dá)量最低;PvGF1f在莖中表達(dá)量最高,其次是老葉和花,在幼葉中表達(dá)量微量表達(dá),在根中沒有檢測(cè)到表達(dá)。提示PvGF14 c可能與雷竹開花有關(guān)。
　　3、構(gòu)建PvGF14c-GFP融合表達(dá)載體,