朝藥關(guān)蒼術(shù)血清藥物化學(xué)初步研究.pdf

1、目的：
　　1.建立關(guān)蒼術(shù)血清藥物化學(xué)的實驗方法。
　　2.采用HPLC法研究灌胃關(guān)蒼術(shù)大鼠血清指紋圖譜，同時初步探討灌胃關(guān)蒼術(shù)水提取物后的大鼠血中移行成分；采用氣流吹掃微注射器萃取法與氣相質(zhì)譜法聯(lián)用的方法（簡稱GP-MSE-GC-MS法）分析灌胃關(guān)蒼術(shù)藥材水提取物后大鼠血中揮發(fā)性和半揮發(fā)性成分，為關(guān)蒼術(shù)藥材的質(zhì)量控制提供實驗基礎(chǔ)。
　　3.采用HPLC法對關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)進(jìn)行移行成分初步比較，比較這3種蒼術(shù)屬植物的

2、相似性，為蒼術(shù)屬植物的合理開發(fā)利用提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.關(guān)蒼術(shù)含藥血清HPLC分析
　　選擇關(guān)蒼術(shù)血清藥物化學(xué)實驗中較為重要的幾個因素，每個因素設(shè)置一些不同的實驗條件進(jìn)行HPLC分析，以關(guān)蒼術(shù)給藥血清和空白血清HPLC圖譜相比，峰形較好，移行成分最多的實驗方法為本研究中采用的實驗方法。即設(shè)240 nm、254 nm、270 nm和340 nm4個波長，篩選最佳檢測波長；設(shè)甲醇、乙腈和水的不同比率為不同洗脫

3、條件進(jìn)行實驗，探索最佳流動相；比較A(1次/d)、B(2次/d)、C(3次/d)、D(2次/d共2天)和E(2次/d共3天)的不同的大鼠給藥方式，確定較好的給藥方法；設(shè)關(guān)蒼術(shù)水提取、甲醇提取、超臨界提取和粉末混懸液，探索較好的灌胃溶液；比較高氯酸法、甲醇沉淀法和冷凍干燥-甲醇沉淀血清處理方法，確定最適合的方法。
　　2.關(guān)蒼術(shù)含藥血清GP-MSE-GC-MS分析
　　將含藥血清和空白血清冷凍干燥，取冷凍干燥血清粉末，用 GP

4、-MSE法萃取其中揮發(fā)油和半揮發(fā)性成分，按照如下GC-MS分析條件測定其揮發(fā)性成分，并進(jìn)行分析比較。
　　GC-MS分析條件：DB-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，載氣為He（純度≧99.99％），流速為1 mL/min。采取不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為2.0μL。采用程序升溫，進(jìn)樣口的溫度為280℃。起始溫度為45℃，保持1 min，4℃/min升高至250℃，再以6℃/min升高至280℃，保持5 min

5、。離子源為EI，溫度為200℃，其轟擊能量為70 eV。
　　3．關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)血中移行成分初步比較
　　通過HPLC色譜圖分析比較空白血清，含藥血清和水提取液的色譜峰異同，探討灌服關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)水提取物后大鼠血中移行成分。
　　結(jié)果：
　　1.關(guān)蒼術(shù)含藥血清HPLC分析
　　水為最佳提取溶劑；給藥三天（每天二次）為最佳給藥方式；冷凍干燥-甲醇沉淀法為較好的血清處理方法；340 nm和240 nm為

6、較適合的檢測波長；水（A）和乙腈（B）的混合液的梯度洗脫較好，即340 nm為檢測波長時洗脫梯度為：0～10 min40%B～50%B，10～15 min50%B～50%B，15～40 min50%B～65%B，40～50 min65%B～95%B，50～60 min95%B～100%，60～65 min100%B～40%B；240 nm為檢測波長時洗脫梯度為：0～8 min40%B～50%B，8～28 min50%B～75%B，28～

7、40 min75%B～90%B，40～60 min90%B～100%B，60～65min100%B～40%B。
　　通過實驗建立了240 nm和340 nm檢測波長條件下的關(guān)蒼術(shù)血清指紋圖譜，與空白血清比較分別產(chǎn)生7個和6個新的峰。
　　2.關(guān)蒼術(shù)GP-MSE-GC-MS分析
　　與空白血清比較，灌胃關(guān)蒼術(shù)水提取物、甲醇提取物和粉末混懸液的大鼠血清色譜峰中分別有1個、4個和4個新的峰。根據(jù)質(zhì)譜 NISI08數(shù)據(jù)庫檢索和

8、并參考相關(guān)文獻(xiàn)，初步鑒定關(guān)蒼術(shù)水提取物、甲醇提取物和粉末混懸液的大鼠血清GC-MS總離子流圖中共有1個成分即均為 Cystine（胱氨酸），甲醇提取物中鑒定出6-乙烯基-4,5,6,7-四氫-3,6-二甲基-5-異丙烯基-(S)-香豆酮（Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-，trans-）和馬鈴薯螺二烯酮（solavetivone），其他均

9、未鑒定。在藥材 GC-MS總離子流圖中也檢測到6-乙烯基-4,5,6,7-四氫-3,6-二甲基-5-異丙烯基-(S)-香豆酮（Benzofuran,6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-，trans-）和鈴薯螺二烯酮（solavetivone)。
　　2.關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)及蒼術(shù)血中移行成分初步比較研究
　　240 nm為檢測波長分析時關(guān)蒼術(shù)和蒼術(shù)藥材中有1

10、個相似成分進(jìn)入血液；340 nm為檢測波長分析時關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)和蒼術(shù)各有1個相似的成分進(jìn)入血液；關(guān)蒼術(shù)和蒼術(shù)藥材中有2個相似的成分進(jìn)入血液。
　　結(jié)論：
　　1.所建立的關(guān)蒼術(shù)含藥血清HPLC法簡便、準(zhǔn)確，可用于關(guān)蒼術(shù)血清移行成分的分析研究。
　　2.關(guān)蒼術(shù)藥材的血清移行成分主要來自原藥材原型成分、代謝產(chǎn)物或受關(guān)蒼術(shù)刺激而產(chǎn)生的應(yīng)激產(chǎn)物兩個方面。
　　3.3種蒼術(shù)屬植物的血中移行成分的行為中，關(guān)蒼術(shù)與蒼術(shù)的血清移行