玉屏風(fēng)血清藥物化學(xué)的研究.pdf

1、中藥是中國(guó)的傳統(tǒng)藥物,有上千年的應(yīng)用歷史,中醫(yī)藥在長(zhǎng)期的醫(yī)療實(shí)踐中逐漸形成了自己一套獨(dú)特的理論體系,是中國(guó)傳統(tǒng)文化和世界傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精華。長(zhǎng)期以來(lái),我國(guó)在中藥研究方面缺乏創(chuàng)新,藥效不穩(wěn)定、毒性不清楚、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確、藥物作用機(jī)理不清、缺少與國(guó)際接軌的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等問題,在很大程度上限制了中藥在臨床上的廣泛使用,降低了中藥在在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。現(xiàn)代中藥應(yīng)是成分明確,質(zhì)量可控,機(jī)制基本清楚,安全有效。近年來(lái)隨著醫(yī)藥市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇和我國(guó)加入WT

2、O,“中藥現(xiàn)代化”熱潮方興未艾,探討中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、科學(xué)的控制中藥的質(zhì)量已成為當(dāng)今醫(yī)藥界研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。
　　 中藥血清藥物化學(xué)是“以藥物化學(xué)的研究手段和方法為基礎(chǔ),多種現(xiàn)代技術(shù)綜合運(yùn)用,分析鑒定中藥口服后血清中移行成分,研究其藥效相關(guān)性,確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并研究其體內(nèi)過程的應(yīng)用學(xué)科”。中藥血清藥物化學(xué)自誕生以來(lái)就顯示出了其蓬勃的生機(jī),取得許多卓越的成績(jī),有力地推動(dòng)了中醫(yī)藥現(xiàn)代的腳步。運(yùn)用現(xiàn)代分析手段,建立給藥樣品的全成分

3、指紋圖譜,明確給藥樣品中所含原型成分,測(cè)定主要成分的含量,確認(rèn)血中移行成分。這是血清藥物化學(xué)研究的重要內(nèi)容之一。
　　 中藥指紋圖譜可以有效全面地控制中藥質(zhì)量,推動(dòng)中藥現(xiàn)代化進(jìn)程,可以使有上千年應(yīng)用歷史的中藥被世界醫(yī)學(xué)界所接受。中藥指紋圖譜的應(yīng)用是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一個(gè)飛躍,實(shí)現(xiàn)全過程監(jiān)控中藥及其制劑的生產(chǎn),對(duì)中藥新藥的概念有了新的突破性認(rèn)識(shí),保證藥品安全有效。
　　 目前,有關(guān)中藥色譜指紋圖譜的建立、分析、評(píng)價(jià)大多采用色譜

4、技術(shù)參數(shù),常規(guī)HPLC檢測(cè)方法所獲得的圖譜信息量少,定性能力較弱,在缺少對(duì)照品的情況下,較難獲得關(guān)于中藥復(fù)方中藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的比較全面和確切的信息。
　　 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),是把高效液相色譜法的應(yīng)用范圍廣、分離效能高的優(yōu)勢(shì)與質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的檢測(cè)能力相結(jié)合,是復(fù)雜體系分離分析最有力的研究手段。在中藥復(fù)方的分析中引入質(zhì)譜技術(shù),可獲得豐富的結(jié)構(gòu)信息,可在沒有標(biāo)準(zhǔn)品的情況下對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定；HPLC-MS的靈敏度極高

5、,對(duì)體內(nèi)微量物質(zhì)的定性定量分析非常有利；對(duì)于中藥復(fù)方和體內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)這樣復(fù)雜體系的研究,HPLC-MS有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。
　　 玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)組成,是中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典方劑,該方藥味簡(jiǎn)單,配伍精當(dāng),具有益氣固表止汗之功,主治氣虛表弱,易感風(fēng)寒。經(jīng)數(shù)千年臨床應(yīng)用,療效卓越。該方制劑各版中國(guó)藥典均予收載。
　　 目前,對(duì)于玉屏風(fēng)散全方的研究多集中在其藥理藥效研究,對(duì)于玉屏風(fēng)散的化學(xué)研究,集中在方中各單味藥的化學(xué)成

6、分的研究,各單味藥化學(xué)成分研究比較成熟。而對(duì)于玉屏風(fēng)散全方的化學(xué)研究,只局限在對(duì)其中某個(gè)有效成分的測(cè)定和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。有關(guān)應(yīng)用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)玉屏風(fēng)全方的血清中移行成分的檢測(cè)未見文獻(xiàn)報(bào)道。研究玉屏風(fēng)散的血清藥物化學(xué),對(duì)于揭示玉屏風(fēng)散藥效物質(zhì)基礎(chǔ),闡明其配伍的科學(xué)內(nèi)涵具有重要的意義。
　　 研究目的:建立玉屏風(fēng)主要成分的含量測(cè)定方法,建立玉屏風(fēng)水煎液的HPLC-MS指紋圖譜,對(duì)照玉屏風(fēng)水煎液的HPLC-MS指紋圖譜,檢測(cè)

7、大鼠中玉屏風(fēng)含藥血清中移行成分,并對(duì)血中移行成分進(jìn)行鑒定。
　　 研究方法:應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定玉屏風(fēng)主要成分。制備玉屏風(fēng)各單味藥材及全方灌胃藥液,選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,灌胃給藥,制備含藥血清,應(yīng)用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定玉屏風(fēng)各單味藥材及全方灌胃藥液與含藥血清的總離子流圖,將體內(nèi)成分譜與體外成分譜對(duì)比,比對(duì)二者在相同保留時(shí)間處色譜峰的質(zhì)譜圖,檢測(cè)血清中的移行成分,并與對(duì)照品的質(zhì)譜圖進(jìn)行對(duì)比,鑒定部分入血成分。

8、>　　 研究結(jié)果:建立了同時(shí)檢測(cè)玉屏風(fēng)水煎液中升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、槲皮素、亥茅酚苷、芒柄花素等六種有效成分的定量分析方法；建立了玉屏風(fēng)水煎液的HPLC-MS指紋圖譜,標(biāo)定了12個(gè)共有指紋峰,對(duì)其進(jìn)行了藥材歸屬,并鑒定了6個(gè)成分；對(duì)照玉屏風(fēng)水煎液的HPLC-MS指紋圖譜,研究了玉屏風(fēng)散體內(nèi)成分譜,結(jié)果在玉屏風(fēng)含藥血清中檢測(cè)到7個(gè)移行成分,鑒定了其中6個(gè)成分:升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、亥茅酚苷、黃芪甲

9、苷、芒柄花素。并推斷以上6個(gè)成分是玉屏風(fēng)的藥效物質(zhì)。
　　 本課題的創(chuàng)新之處:首次建立了玉屏風(fēng)的HPLC-MS指紋圖譜,并對(duì)其各共有指紋峰進(jìn)行了藥材歸屬；首次應(yīng)用HPLC-MS研究了中藥經(jīng)典方劑玉屏風(fēng)的血清藥物化學(xué),檢測(cè)到玉屏風(fēng)含藥血清中7個(gè)移行成分,鑒定了其中6個(gè)入血成分,并推斷這6個(gè)成分為玉屏風(fēng)的藥效物質(zhì)。
　　 本課題研究為進(jìn)一步開展玉屏風(fēng)散的血清藥物化學(xué)研究,積累了大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),提供了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方法。對(duì)于揭示玉

10、屏風(fēng)散藥效物質(zhì)基礎(chǔ),闡明其配伍的科學(xué)內(nèi)涵具有重要的意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,應(yīng)用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù),建立玉屏風(fēng)水煎液的HPLC-MS指紋圖譜,比HPLC-DAD指紋圖譜更精確,更便于比對(duì)確認(rèn)。利用相關(guān)質(zhì)譜圖,可獲得大量的化學(xué)結(jié)構(gòu)相關(guān)信息,可避免DAD檢測(cè)器色譜峰可能帶來(lái)的“偽證”。HPLC-MS技術(shù)靈敏度高,適用于血清中微量藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。開展HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用研究,有助于玉屏風(fēng)指紋圖譜的建立與完善,為玉屏風(fēng)