椎間盤髓核組織的自身免疫反應(yīng)及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、在臨床法醫(yī)學(xué)鑒定工作中，涉及腰椎間盤突出癥(Lumbar intervertebraldisc herniation，LDH)的案件較多。目前，工作中關(guān)于LDH的鑒定主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查以及神經(jīng)電生理學(xué)技術(shù)。然而由于臨床表現(xiàn)的主觀性，影像學(xué)檢查只能單純反應(yīng)形態(tài)學(xué)變化，而神經(jīng)電生理技術(shù)側(cè)重于神經(jīng)根功能狀態(tài)的評估，各自具有一定的局限性。近年來，LDH免疫學(xué)方面的研究有望為腰椎間盤退行性改變與LDH的鑒別及LDH發(fā)病時間的法醫(yī)學(xué)鑒定提

2、供新的手段。 椎間盤的髓核組織自胚胎發(fā)育成熟后便因血管退化而無血供，被纖維環(huán)包裹其中與血液及淋巴系統(tǒng)相隔絕，與外界物質(zhì)的交換僅通過軟骨終板的滲透作用完成。獨特的解剖結(jié)構(gòu)和物質(zhì)交換方式使其具備了自身抗原的基礎(chǔ)。在損傷或疾病等病理情況下，髓核組織接觸免疫系統(tǒng)，引起自身免疫反應(yīng)(autoimuneresponse)。 本研究采用新西蘭大耳兔髓核組織免疫同種兔后制備抗血清，免疫酶斑點技術(shù)(Dot-ELISA)測定免疫前后及實驗組

3、與對照組血清IgG、IgM抗體滴度變化情況，從而檢測髓核組織的免疫原性，并探討血清中抗髓核抗體滴度變化對法醫(yī)學(xué)鑒定腰椎間盤突出癥的意義所在。 材料與方法 1、新西蘭大耳兔，雄性，健康狀況良好，體重2.0-2.5千克，月齡在六個月以上。 2、無菌條件下提取新西蘭大耳兔髓核組織勻漿、離心后的的懸濁液做為抗原溶液。 3、實驗組皮下注射髓核組織懸濁液與佐劑的乳化劑免疫新西蘭大耳兔，生理鹽水對照組注射與實驗組相同劑

4、量生理鹽水，佐劑對照組注射與實驗組相同劑量佐劑，實驗方法相同。 4、免疫酶斑點技術(shù)檢測血清IgG、IgM抗體滴度的變化及程度。 5、卡方檢驗分析免疫前后血清IgG、IgM抗體滴度變化及實驗組與對照組血清IgG、IgM抗體滴度變化的差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1、方陣實驗篩選IgG抗體最適實驗條件，包被抗原濃度50μg/ml時，免疫后血清1：1-1：128稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清

5、中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級遞減趨勢。 2、方陣實驗篩選IgM抗體最適實驗條件，包被抗原濃度40μg/ml時，免疫后血清1：1-1：32稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級遞減趨勢。 3、兔髓核組織懸濁液為抗原皮下注射免疫同種兔，免疫后血清中IgG、IgM抗體滴度較免疫前升高，血清中IgG抗體滴度為1：128，IgM抗體滴度為1：32，二者升高程度有較大差異。 4、髓核組

6、織懸濁液為抗原免疫后的實驗組與生理鹽水對照組及佐劑對照組相比較，實驗組血清中IgG、IgM抗體滴度較對照組升高。 討論 當(dāng)抗原與其對應(yīng)抗體分子比例最為合適時，它們才會彼此相互連接成具有完整主體結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物巨大網(wǎng)格狀聚集體，使蛋白質(zhì)分子的疏水結(jié)構(gòu)充分暴露，此時的抗原與其對應(yīng)的抗體結(jié)合最為牢固。經(jīng)過方陣實驗可知，包被抗原濃度為50μg/ml免疫后血清稀釋1：128為檢測IgG抗體的最適實驗條件；包被抗原濃度為40μg/m

7、l，免疫后血清稀釋1：32為檢測IgM抗體的最適實驗條件。 在最適實驗條件下，檢測血清IgG、IgM抗體滴度，實驗結(jié)果按α=0.05水平檢驗，免疫前后血清中IgG、IgM抗體滴度變化及實驗組與對照組血清中IgG、IgM抗體滴度變化的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。說明髓核組織具有免疫原性，與機體的免疫系統(tǒng)接觸后，可刺激機體發(fā)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致血清中抗髓核IgG抗體、抗髓核IgM抗體滴度的升高。 髓核組織抗原成分復(fù)雜，具有較高異質(zhì)性，其

8、中一部分不是髓核組織所特有的，與兔體內(nèi)其他組織器官具有相同或相似的抗原；或髓核組織內(nèi)含有的特異性抗原尤其是蛋白質(zhì)抗原成分具有多個抗原決定簇，與體內(nèi)其他組織器官的抗原決定簇相同或相似，血清中存在的抗體能與髓核組織內(nèi)抗原成分發(fā)生交叉反應(yīng)。則未經(jīng)過免疫的兔血清中抗體和髓核組織能夠發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)陽性或者弱陽性改變。 在排除感染、肝腎疾病及其他自身免疫性疾病等導(dǎo)致血清中抗體滴度升高的情況下，根據(jù)血清中抗體滴度變化情況，可對腰椎間盤退行性改