基于微流控分析系統(tǒng)的單細(xì)胞進(jìn)樣、溶膜、分離和活性氧檢測(cè)的研究.pdf

1、過氧化氫(H2O2)在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中充當(dāng)著第二信使的角色，其在生物體的生理、病理、器官退化等過程中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。另外，H2O2與其他的活性氧自由基如超氧陰離子(O2-。)和羥基自由基(·OH)具有很密切的關(guān)系。因此在單細(xì)胞水平上對(duì)H2O2進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于重大疾病的早期診斷、治療、藥物篩選和細(xì)胞生理、病理過程的研究有重要的指導(dǎo)意義。
　　本論文主要是以實(shí)驗(yàn)室自行搭建的微流控芯片單細(xì)胞活性氧自動(dòng)分析儀和高靈敏度激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器

2、為基礎(chǔ)，利用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部設(shè)計(jì)合成的新型綠色熒光探針二(對(duì)甲苯磺?；?-二氯熒光素(FS)，采用電動(dòng)門式進(jìn)樣法自動(dòng)化實(shí)現(xiàn)了單細(xì)胞進(jìn)樣、單細(xì)胞溶膜、高效電泳分離和胞內(nèi)H2O2的定量檢測(cè)。本論文主要含有兩部分，內(nèi)容如下:
　　第一章是引言，主要是對(duì)多年來單細(xì)胞組分分析所涉及到的操作單元，包括單細(xì)胞操縱手段、衍生方法、溶膜手段和檢測(cè)手段進(jìn)行了概述，然后對(duì)微流控芯片在單細(xì)胞組分分析中的應(yīng)用進(jìn)行了詳細(xì)的綜述，并闡述了近年來興起的高通量單細(xì)胞分析

3、技術(shù)。
　　第二章建立了基于電動(dòng)門式進(jìn)樣方法的微流控系統(tǒng)首次實(shí)現(xiàn)了單個(gè)肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)H2O2的定量檢測(cè)。將經(jīng)熒光探針FS孵育過的細(xì)胞引入微流控芯片樣品池，利用電動(dòng)門式進(jìn)樣和激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器在簡(jiǎn)單十字芯片上自動(dòng)化實(shí)現(xiàn)了單細(xì)胞進(jìn)樣(細(xì)胞采樣和單細(xì)胞捕獲)、溶膜、電泳分離和單細(xì)胞內(nèi)H2O2的定量檢測(cè)。該方法主要包含三個(gè)時(shí)段:第一時(shí)段(細(xì)胞采樣階段)，樣品池中的細(xì)胞在電場(chǎng)力的驅(qū)動(dòng)作用下流經(jīng)十字交叉口后流向樣品廢液池；第二時(shí)段(單細(xì)

4、胞裝載階段)，改變電壓條件會(huì)有單個(gè)細(xì)胞被捕獲進(jìn)入分離通道；第三時(shí)段(細(xì)胞溶膜和電泳分離階段)，被捕獲的單個(gè)細(xì)胞在高壓電場(chǎng)的作用下發(fā)生快速溶膜和電泳分離，并由激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器所檢測(cè)，而樣品池中的其他細(xì)胞在電場(chǎng)力的驅(qū)動(dòng)作用下仍然流經(jīng)十字交叉口后流向樣品廢液池，而不會(huì)對(duì)分離分析造成干擾。經(jīng)該方法檢測(cè)到的單個(gè)肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)H2O2的平均含量為16.09±9.84 amol(n=15)。該方法具有簡(jiǎn)單、快速、易于實(shí)現(xiàn)、自動(dòng)化和集成化程度高