紅樹內(nèi)生細(xì)菌AmS2菌株對(duì)植物病原真菌抑制作用研究.pdf

1、利用表面消毒方法從鹵蕨(Acrostichum aureurm)、桐花樹(Aegiceras corniculatum)、老鼠簕(Acanthus ilicifolius)、秋茄(Kandelia candel)、紅海欖(Rhizophora stylosa)、木欖(Bruguiera gymnorrhiza)和白骨壤(Auicennia mariana)等紅樹植物的根、莖、葉中分離獲得151株內(nèi)生細(xì)菌：用對(duì)峙生長法從中篩選到對(duì)辣椒疫霉

2、、黃瓜枯萎菌、西瓜枯萎菌、香蕉枯萎菌和香蕉炭疽菌等5種供試植物病原真菌中至少一種具有拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌83株，占總分離菌株數(shù)的54.97％，其中以AmL1、AmL2、AmS2、AcS3和AiL3等菌株的抑菌活性最強(qiáng)。本文以來自白骨壤的AmS2菌株為研究對(duì)象，對(duì)其分類學(xué)地位、發(fā)酵液的抗菌作用及性質(zhì)、發(fā)酵液甲醇提取物對(duì)病原真菌的毒力等進(jìn)行了測(cè)定。 通過形態(tài)觀察、生理生化指標(biāo)測(cè)定及16S rDNA序列同源性分析，將AmS2菌株鑒定為解

3、淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)。 以芒果炭疽菌為指示菌，對(duì)AmS2菌株發(fā)酵液穩(wěn)定性的測(cè)定結(jié)果表明：發(fā)酵液對(duì)熱較穩(wěn)定(100℃處理30 min其抑菌活性基本不變，處理60 min以上其抑菌活性略有下降)、抗紫外(紫外線處理3小時(shí)其抗菌活性不變)，pH4～7條件下比較穩(wěn)定。 菌株抗菌物質(zhì)分離提取結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AmS2發(fā)酵液的硫酸銨沉淀物無抗菌活性，說明其抗菌物質(zhì)可能是非蛋白類物質(zhì)，用石油醚、

4、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等4種有機(jī)溶劑分別萃取，其萃取液也無抗菌活性，說明該菌株的抗菌物質(zhì)不溶于這4種有機(jī)溶劑。進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AmS2菌株的抗菌物質(zhì)易溶于水和甲醇等強(qiáng)極性溶劑。為此，本文對(duì)AmS2菌株發(fā)酵液的甲醇提取物的抗菌作用開展了進(jìn)一步研究。結(jié)果表明，該抗菌提取物對(duì)芒果炭疽菌、辣椒炭疽菌、香蕉炭疽菌、香蕉枯萎菌、黃瓜枯萎菌、西瓜枯萎菌、辣椒疫霉、水稻紋枯病菌等均有較強(qiáng)的抑菌活性，其抑制病菌菌絲生長的EC50分別為0.9772、0

5、.8923、1.0076、1.3109、4.0993、2.7589、17.9475、1.4021 mg/mL；實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，甲醇提取物濃度為2.0 mg/mL時(shí)，對(duì)芒果炭疽菌的菌絲生長、分生孢子形成和分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為73.83％、93.22％、68.31％；當(dāng)提取物濃度為3.0 mg/mL時(shí)，可導(dǎo)致芒果炭疽病菌分子孢子的消解；當(dāng)濃度達(dá)到7.5 mg/mL時(shí)，可完全抑制分生孢子的形成。由此可見，AmS2菌株的抗菌物質(zhì)抑菌譜較廣，且