人天冬氨酸-β-羥化酶基因修飾樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)CTLs對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的殺傷作用.pdf

1、目的：探索含人天冬氨酸-β-羥化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)基因的重組腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immature dendritic cells， imDCs)誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes，CTLs)對(duì)肝癌細(xì)胞系SMMC-7721的體外殺傷效應(yīng)。
　　方法：C57BL/6小鼠骨髓分離培養(yǎng) DCs，重組腺病毒（Ad-ASPH-IRES2-EGFP）感染未成

2、熟DCs制備DCs疫苗，分為三組：Ad-ASPH-IRES2-EGFP感染未成熟 DCs組（ DCs-ASPH組)、Ad-IRES2-EGFP感染未成熟DCs組(DCs-GFP組)和未成熟DCs組（imDCs組)，各組DCs中ASPH蛋白的表達(dá)采用Western blot檢測(cè)、ASPH mRNA的表達(dá)采用real-time PCR檢測(cè)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)成熟DCs表型變化。分離同一來(lái)源的小鼠脾 T淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定其表面特異性分子表達(dá)

3、量，DCs疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生CTLs后與SMMC-7721細(xì)胞混合培養(yǎng)，采用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CTLs對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的殺傷作用，ELISA檢測(cè)CTLs上清液中IFN-γ含量。
　　結(jié)果：成功培養(yǎng)出 DCs并制備 DCs疫苗，ASPH蛋白和 ASPH mRNA在DCs-ASPH組中高表達(dá)，DCs-ASPH組DCs細(xì)胞表面標(biāo)志物CD80、MHCⅡ和CD11c顯著高于DCs-GFP組和imDCs組?？俆淋巴細(xì)胞純度 CD3