乙醇在犬體內(nèi)的死后再分布及保存人血液中穩(wěn)定性的研究.pdf

1、目的： 1.建立生物樣品中乙醇和自生醇類的直接進樣和頂空進樣氣相色譜檢測方法； 2.建立乙醇的死后再分布、保存檢材中穩(wěn)定性和自生醇類的研究模型和方法： 3.研究犬體內(nèi)乙醇的死后再分布規(guī)律、保存檢材中乙醇的穩(wěn)定性和自生醇產(chǎn)生規(guī)律，為涉及酒精案件檢材的采集、保存、檢測和結(jié)果分析提供科學(xué)依據(jù)。 方法： 1.乙醇及自生醇的氣相色譜檢測方法 1.1直接進樣氣相色譜法：體液、組織(勻漿)離心后取上清，

2、加入內(nèi)標液，柱頭直接進樣，TRACE2000氣相色譜儀(FID檢測器，PEG融硅石英毛細管柱)檢測乙醇及自生醇，保留時間定性，內(nèi)標法定量。 1.2頂空氣相色譜法：取血樣于頂空瓶中，加入內(nèi)標液及蒸餾水，平衡后自動頂空進樣器進樣，Agilent6820氣相色譜儀(FID檢測器，DB-5毛細管柱)檢測乙醇及自生醇，保留時間定性，內(nèi)標法定量。 2.死后再分布研究 2.1動物模型犬6只，分別于10min內(nèi)經(jīng)胃管灌入3.5m

3、l/kg劑量的乙醇，1.5h后CO<,2>處死。 2.2樣品采集與處理實驗犬的心電、血壓和呼吸全部消失后，置于室溫下，分別于死后0、2、4、8、12、24、48、72、96、120h取左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔靜脈血、玻璃體液、膽汁、肝臟、脾臟、肺臟、。腎臟、大腦和肌肉，直接進樣氣相色譜法檢測乙醇及正丙醇含量，同時觀察是否有自生醇產(chǎn)生。 3.保存檢材中乙醇的穩(wěn)定性 3.1模型死亡12h內(nèi)人尸體血

4、液，經(jīng)檢測無自生醇后，用乙醇溶液添加成初始濃度分別為20.12、51.73、77.9、142.29、314.05mg/100ml的樣本。 3.2樣品保存與處理樣本置于不同器皿(塑料袋，試管，注射器)中，分別于室溫、4℃和-20℃中保存，在2、4、7、15、30天經(jīng)頂空氣相色譜法檢測其中乙醇濃度。 4.保存檢材中自生醇的研究 4.1保存人血液中自生醇的研究離體模型：字白人尸體樣本分別置于不同器皿(塑料袋，試管，注射

5、器)中，室溫、4℃和-20℃條件中保存，在2、4、7、15、30天經(jīng)頂空氣相色譜法檢測乙醇和正丙醇含量，并觀察其它白生醇的產(chǎn)生情況。 4.2犬體內(nèi)自生醇的研究在體模型：犬3只，經(jīng)CO<,2>處死，心電、血壓和呼吸全部消失后，置于室溫下，分別于死后0、2、4、8、12、24、48、72、96、120h取左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔靜脈血、玻璃體液、膽汁、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、大腦和肌肉，每次取材后將肌肉，皮膚逐層

6、縫合，盡量保持機體的完整性。上述檢材經(jīng)直接進樣氣相色譜法檢測乙醇及正丙醇含量，并觀察其它自生醇的產(chǎn)生情況。 5.統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果以均數(shù)±標準差(x±s)表示 結(jié)論： 1.本研究建立了生物樣品中乙醇和自生醇類直接進樣和頂空氣相色譜檢測方法，可使乙醇和自生醇達到良好分離，靈敏度高，可應(yīng)用于酒精中毒的法醫(yī)學(xué)研究和法醫(yī)學(xué)鑒定。 2.醉酒劑量灌胃后1.5h，犬體內(nèi)乙醇含

7、量順序為玻璃體液>左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔靜脈血、尿>肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、大腦>膽汁>肌肉。玻璃體液中乙醇含量與心血和下腔靜脈乙醇含量之比為1.41；膽汁與心血和下腔靜脈中乙醇含量之比為0.63。 3.乙醇在灌胃犬體內(nèi)可發(fā)生死后再分布現(xiàn)象，左心血受到很大影響，比較而言，玻璃體液、肌肉和腦組織受到死后再分布影響較少。且死亡犬體內(nèi)會產(chǎn)生乙醇、正丙醇、丙酮和異丙醇。在酒精中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中，應(yīng)綜合考慮死后再

8、分布對體內(nèi)酒精含量的影響。 4.保存溫度，器皿類型和初始濃度均對血樣中乙醇濃度有不同程度的影響，其中保存溫度和器皿類型的影響較為顯著。而且除了保存溫度與保存時間不存在交互作用以外，其它因素兩兩之間都存在交互作用。鑒定人在保存和檢測樣本過程中只有加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，才能提供客觀準確的檢測數(shù)據(jù)及保證復(fù)查結(jié)果的有效性。 5.在體模型和離體模型均會產(chǎn)生自生醇，溫度對其影響較大。大部分組織如心血、下腔靜脈血、尿、膽汁、肝臟、脾

9、臟、肺臟和腎臟在死后12h就有不同程度的乙醇和正丙醇產(chǎn)生，其中，120h尿中乙醇濃度可以達104.92mg/100ml。肌肉，玻璃體液，大腦分別在死后48，72，96h檢出乙醇，犬體內(nèi)乙醇和正丙醇的生成存在正相關(guān)；人空白血樣在-20℃放置30天未檢出任何自生醇。在涉及乙醇的法醫(yī)學(xué)檢案中，特別是腐敗樣品，應(yīng)注意自生醇的檢測，尿中檢出乙醇不能判定生前飲酒，應(yīng)采集不易腐敗的組織如玻璃體液、肌肉和大腦，檢測其乙醇含量，并觀察與正丙醇比例關(guān)系來進