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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.建立犬甲胺磷死后分布、保存檢材和埋葬尸體中的分解動(dòng)力學(xué)動(dòng)物模型;
2.改進(jìn)甲胺磷氣相色譜檢測(cè),建立其GC-FPD、氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法;
3.研究甲胺磷在犬體內(nèi)的死后分布、保存檢材中的分解動(dòng)力學(xué)及埋葬尸體中的分解動(dòng)力學(xué)。
方法:
1.甲胺磷在犬體內(nèi)的死后分布研究:取犬6只,分別經(jīng)口灌胃染毒8LD50甲胺磷農(nóng)藥,死后迅速解剖動(dòng)物,取心、肝、脾、肺、腎、
2、腦、胃壁、心血、膽汁、胸肌、右后肢肌肉、右前肢肌肉等組織,放置于-20℃冰箱內(nèi)保存待檢,樣品經(jīng)酸處理后,二氯甲烷萃取,氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè),根據(jù)甲胺磷的特征離子峰、保留時(shí)間定性與內(nèi)標(biāo)法、工作曲線法定量,研究犬體內(nèi)的甲胺磷分布情況。
2.甲胺磷在保存檢材中的分解動(dòng)力學(xué)研究:取犬3只,8倍LD50劑量甲胺磷灌胃染毒,死后立即解剖取肝和血,每只犬心血和肝分四等份,其中三份分別置于20℃、4℃、-20℃保存;另一份心血
3、中加氟化鈉至1%,另一份肝臟加4%甲醛溶液固定,20℃保存;分別于0小時(shí)、7天、16天、60天、180天檢測(cè)其中甲胺磷含量。
3.甲胺磷在埋葬尸體中的分解動(dòng)力學(xué)研究
(1)埋葬尸體中甲胺磷含量隨時(shí)間變化:取健康犬30只,8倍LD50劑量甲胺磷灌胃染毒致死。0d的立即解剖取材,其余裝入塑料袋,不封口,埋于太原市東山實(shí)驗(yàn)基地。分別于29天、58天、89天、139天、211天、225天挖出后,解剖,取材,GC-FP
4、D、GC/MS法檢測(cè)其中甲胺磷含量。
(2)埋葬方式對(duì)甲胺磷在埋葬尸體中分解動(dòng)力學(xué)的影響:取健康犬9只,8倍LD50劑量甲胺磷灌胃染毒致死后隨機(jī)分成3組,分別裝入塑料袋、編織袋和木箱(棺材)中埋于實(shí)驗(yàn)基地,75天后挖出解剖取材,檢測(cè)其中甲胺磷的含量。
(3)埋藏溫度(季節(jié))對(duì)甲胺磷在埋葬尸體中分解動(dòng)力學(xué)的影響:健康犬6只,其中3只于09/3/28以8倍LD50劑量甲胺磷灌胃染毒致死后埋葬,于75天后(09/6
5、/12)挖出,另3只同劑量同方式處死,于09/8/24埋葬,于75天(09/11/8)挖出。解剖取材,檢測(cè)各臟器中甲胺磷含量。
結(jié)果:
1.死后分布:
研究結(jié)果顯示,8倍LD50灌胃致死犬體內(nèi)甲胺磷濃度由高到低分別為胃(99.84±30.87μg/g)>脾(46.87±28.67μg/g)、肝(43.82±22.74μg/g)、腎(43.79±29.04μg/g)、心血(35.36±13.98μ
6、g/ml)、肺(35.25±18.59μg/g)、尿(34.81μg/g)>胸肌(19.23±17.18μg/g)、右前肢(16.92±8.98μg/g)、心(15.09±6.11μg/gμg/g)、右后肢(12.83±7.63μg/g)、腦(10.91±4.13μg/g)>膽汁(6.75±1.45μg/ml)、玻璃體液(6.2263±4.97μg/ml)(t檢驗(yàn),p<0.05)。
2.保存檢材分解動(dòng)力學(xué):
7、不同條件保存血和肝中甲胺磷含量均呈下降趨勢(shì),20℃、4℃、-20℃、20℃(1%NaF)保存第7天、16天、7天和4天犬血中甲胺磷含量顯著下降至初始濃度的55.1±18.2%、16.8±6.6%、61.5±11.0%和4.2±3.5%(p<0.05);20℃、4℃、-20℃、20℃(4%甲醛)保存至7天、7天、16天、7天肝中甲胺磷含量顯著下降至初始濃度的25.8±12.7,36.7±16.8%、51.2±14.1%和6.9±2.2%(
8、p<0.05);20℃、4℃、-20℃、20℃(加NaF至1%)保存180天、180天、180天和12天犬血中甲胺磷濃度分別顯者下降至最初濃度的0.2±0.2%、1.4±1.2%、4.5±2.1%和0.6±0.2%;20℃、4℃、-20℃、20℃(4%甲醛)保存180天時(shí),肝臟中甲胺磷濃度分別顯者下降至最初濃度的2.6±1.5%、2.9±1.1%、5.2±2.8%、2.1±0.3%。1%NaF血組外其余組分解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程二室開(kāi)放模
9、型,可用Ct=Co-αt+Cle-βt表示。NaF血組分解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程一室模型,可用Ct=Co-αt表示。20℃、4℃、-20℃、20℃(4%甲醛)保存肝臟中甲胺磷的快速分解半衰期(t1/2α)和慢速分解半衰期(t1/2β)分別為3.37天、9.46天、16.28天、1.38天和0天(無(wú))、354.72天、195281.20天、113.93天:20℃、4℃、-20℃、20℃(1%NaF)保存血液中甲胺磷的快速分解半衰期(t1/2α
10、)和慢速分解半衰期(t1/2β)分別是2.38天、14.42天、10.04天、0.68天和15.61天、476.9627天、206.78天(1%NaF無(wú))。根據(jù)Ct=Co-αt和Ct=Co-αt+Cle-βt方程計(jì)算的各樣本中甲胺磷含量理論值與實(shí)測(cè)值接近。
3.埋葬尸體分解動(dòng)力學(xué)
8倍LD50灌胃致死犬埋葬尸體中甲胺磷含量呈先上升后下降的趨勢(shì)。埋葬尸體心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、心血中甲胺磷含量從埋葬時(shí)
11、(0天)的100%上升至29天的427.5%±154.7%~1270.9%±1136.2%,然后下降至88天和225天的10.5%±2.4%~86.7%±32.8%和1.1±0.6~6.4±2.6%;右前肢肌、右后肢肌、胸肌、腦中甲胺磷含量從埋葬時(shí)(0天)的100%上升至58天的254.6%±246.2%~304.2%±43.7%,然后下降至139天和225天的9.8%±3.8%~27.2±8.1和0~6.0%±2.3%。
12、 不同埋葬方式研究結(jié)果顯示:埋葬75天塑料袋包裝犬尸體心臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、胸肌中甲胺磷含量顯著高于編織袋包裝犬,其脾臟、腎臟、腦中甲胺磷含量顯著高于木箱(棺材)包裝犬。
不同季節(jié)埋葬結(jié)果顯示:3-6月埋葬犬尸體中心臟、胃組織、右后肢肌中甲胺磷含量顯著高于8-11月埋葬犬,而肝臟、肺臟、腎臟、右前肢肌、胸肌中甲胺磷含量無(wú)顯著性差異。3-6月埋葬犬尸體中甲胺磷含量3.74±0.84μg/ml,而8-11月埋葬犬尸體中均
13、未取到心血。
結(jié)論:
1.本實(shí)驗(yàn)采用8倍LD50劑量(犬)甲胺磷灌胃染毒,建立了甲胺磷的死后分布、保存檢材和埋葬尸體中的分解動(dòng)力學(xué)動(dòng)物(研究)模型,可應(yīng)用于甲胺磷中毒(死)的法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和法醫(yī)毒物動(dòng)力學(xué)研究。
2.本研究建立了生物檢材中甲胺磷的提取和GC-FPD、GC/MS檢測(cè)方法,提取回收率、線性范圍、檢測(cè)靈敏度均達(dá)生物材中毒(藥)物檢驗(yàn)要求,可應(yīng)用于甲胺磷中毒(死)案件的法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和法醫(yī)毒物動(dòng)
14、力學(xué)研究。
3.8 LD50染毒致死犬體內(nèi)甲胺磷含量從高到低依次為:胃>脾、肝、腎、心血、肺、尿>胸肌、右前肢、心、右后肢、腦>膽汁、玻璃體液。甲胺磷中毒(死)埋葬尸體法醫(yī)學(xué)鑒定時(shí),除血外,還可取胃、脾、肝、腎等毒物含量高的組織檢材進(jìn)行毒物分析,其死后分布含量關(guān)系還可用于極端條件下尸體血中甲胺磷含量的推斷。
4.甲胺磷在保存犬血液和肝臟中可發(fā)生分解,含量呈下降趨勢(shì)。低溫保存可減緩甲胺磷的分解,使甲胺磷含量下降
15、減緩,分解半衰期延長(zhǎng);但添加抑菌劑(NaF)或防腐劑(組織甲醛固定)均加速甲胺磷的分解。甲胺磷中毒(死)案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中,檢材應(yīng)在7天內(nèi)及時(shí)送檢和檢測(cè),若不能及時(shí)送檢,應(yīng)冷凍保存,盡快送檢,但不能添加抑菌劑(NaF)或防腐劑(甲醛)。
5.甲胺磷在不同條件保存血和肝臟中分解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程二室或一室開(kāi)放模型,可用Ct=Co-αt+Cle-βt或Ct=Co-αt表示。在甲胺磷中毒(死)案件法醫(yī)學(xué)鑒定時(shí),可采用公式和分解動(dòng)
16、力學(xué)參數(shù)推斷取材當(dāng)時(shí)體內(nèi)甲胺磷濃度或送檢當(dāng)時(shí)檢材中甲胺磷含量,為甲胺磷中毒(死)案件法醫(yī)學(xué)鑒定提供科學(xué)依據(jù)。
6.8倍LD50灌胃致死犬埋葬尸體中甲胺磷含量呈現(xiàn)上升后下降的趨勢(shì),埋藏29或58天含量最高,埋葬225天,犬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、胃、右前肢肌、右后肢肌中仍可檢出甲胺磷(最高1.13±0.61μg/g);埋葬方式對(duì)埋葬犬尸體內(nèi)甲胺磷分解有影響,編織袋內(nèi)埋葬分解較快,棺材次之、塑料袋最慢;埋葬季節(jié)埋葬犬
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