苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)毒物動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、苯嗪草酮,商品名為Goltix,化學(xué)名為4-氨基-3-甲基-6-苯基1,2,4三嗪-5酮,是1975年聯(lián)邦德國(guó)的拜耳(bayer)公司研制推廣開(kāi)發(fā)的低毒、低殘留除草劑新品種。苯嗪草酮主要通過(guò)植物根部吸收,再輸送到葉子內(nèi),通過(guò)抑制光合作用的希爾反應(yīng)而起到殺草的作用。作為我國(guó)應(yīng)用新型的除草劑之一,應(yīng)用非常廣泛。苯嗪草酮在土壤中的光解作用得到證實(shí),在水中光解后產(chǎn)生氨基的脫氨基作用也被證實(shí)。但是目前國(guó)內(nèi)外對(duì)苯嗪草酮的在動(dòng)物體內(nèi)的毒物動(dòng)力學(xué)方面和

2、藥理學(xué)方面研究鮮有報(bào)道。所以闡明其在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的代謝過(guò)程有著非常重要的意義。本實(shí)驗(yàn)研究目的是通過(guò)動(dòng)物模型研究分析苯嗪草酮在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。重點(diǎn)探討了苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)的毒物動(dòng)力學(xué)規(guī)律、組織分布及排泄情況,為進(jìn)一步進(jìn)行毒作用及機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　第一部分：苯嗪草酮高效液相色譜分析方法建立
　　目的:建立苯嗪草酮原藥的高效液相色譜檢測(cè)方法,對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)建立的檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)估。
　　方法:分別改變紫外檢測(cè)

3、波長(zhǎng),流動(dòng)相配比,柱溫及流速對(duì)苯嗪草酮同一濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè),建立并優(yōu)化苯嗪草酮高效液相色譜檢測(cè)方法;配置苯嗪草酮原藥系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,通過(guò)建立的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè),得出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),分析相關(guān)性;以空白血清為例,配置高、中、低三種濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液,對(duì)建立方法的回收率,日間日內(nèi)精密度,樣品常溫下及凍融穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)估。
　　結(jié)果:經(jīng)優(yōu)化后HPLC檢測(cè)苯嗪草酮原藥條件為:色譜柱:150mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱,內(nèi)填μBondapark

4、C18,粒徑:5μm;流動(dòng)相:乙腈:水=1:1;流速:0.5mL/min;柱溫為25°C;檢測(cè)波長(zhǎng):306mm;進(jìn)樣量:20μl。苯嗪草酮出峰時(shí)間為4.36min;標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性相關(guān)R2=0.9999,最低檢出限為0.2μg/ml,不同濃度平均回收率均在95.3％～105.20%之間,日內(nèi)精密度均小于4.63%,日間精密度小于5.52%,常溫下放置12小時(shí)穩(wěn)定性RSD%均小于1.29%,-20℃冷凍10天溶解后穩(wěn)定性RSD%均小于0.89

5、%。
　　結(jié)論:建立的苯嗪草酮原藥HPLC檢測(cè)方法適用于對(duì)苯嗪草酮樣本的檢測(cè)。
　　第二部分：苯嗪草酮血藥濃度隨時(shí)間變化及毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)研究
　　目的:觀察苯嗪草酮在大鼠血清中的濃度隨時(shí)間的變化,并求出主要血藥動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　方法:隨機(jī)選取健康成年雌雄大鼠各4只,雄性組染毒劑量為2000mg/kg,雌性組染毒劑量1360mg/kg,采用灌胃方式染毒,灌胃容量為0.5ml/100g,并于染毒后5、15、30min

6、和1、2、4、8、12、24h采血,分離血清,經(jīng)乙腈提取處理后,采用高效液相色譜法檢測(cè)血清中苯嗪草酮的濃度,DAS3.0軟件計(jì)算毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:雌雄大鼠于染毒5min后均檢測(cè)到苯嗪草酮,血毒濃度均符合一級(jí)吸收一室模型,雄性毒動(dòng)學(xué)方程為C=8.79(e-0.39t-e-1.04t),雌性大鼠毒動(dòng)學(xué)方程為C=4.96(e-0.13t-e-2.01t)。雄性大鼠在染毒后血毒濃度達(dá)峰時(shí)間是Tmax=2h,達(dá)峰濃度為Cmax=6

7、5.96mg/L,雌性大鼠達(dá)峰時(shí)間是Tmax=3.5h,達(dá)峰濃度時(shí)為Cmax=40mg/L,雌雄大鼠毒物吸收半衰期t1/2Ka分別為0.76±0.13和0.69±0.13(h),吸收速率常數(shù)Ka分別為2.01±0.34和1.04±0.24(1/h),消除半衰期t1/2Ke分別為7.34±3.02和2.12±0.96(h),消除速率常數(shù)分別為0.13±0.02和0.39±0.20(1/h),藥-時(shí)曲線(xiàn)下面積AUC0-t分別為1594.08

8、±446.16和975.36±513.54(mg/L*h),AUC0-∞分別為1832.76±462.52和977.37±512.98(mg/L*h),清除率CL分別為0.78±0.21和2.58±1.40(L/h/kg),表觀分布容積Vd分別為10.76±6.41和8.33±7.45(L/kg)。結(jié)論:苯嗪草酮經(jīng)口染毒后能迅速的被大鼠吸收并達(dá)到高峰,提示在大鼠體內(nèi)分布廣泛,但是雌雄大鼠對(duì)毒物代謝具有明顯的性別差異。
　　第三部分

9、：苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)組織分布研究
　　目的:觀察苯嗪草酮經(jīng)消化道吸收后,在大鼠體內(nèi)各個(gè)組織中的毒物分布及隨時(shí)間變化的趨勢(shì)。
　　方法:隨機(jī)抽取健康SD雄性大鼠24只,分為6組,染毒后,分別在0.5h,2h,4h,8h,24h,168h,斷頭處死各組大鼠,取心,肝,脾,肺,腎,腦,睪丸,脂肪,肌肉組織,經(jīng)勻漿,提取,離心,取上清,揮干,復(fù)溶制備樣品后,通過(guò)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè);通過(guò)EXCEL工具處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)

10、果:雄性大鼠灌胃染毒后,0.5h可以在每個(gè)組織中檢測(cè)到,每個(gè)組織中藥物濃度隨時(shí)間變化各具有特點(diǎn),達(dá)峰時(shí)間不同,峰值也不同,其中肝臟的峰值含量最高,其次為心、腦、脾、脂肪、肌肉、肺、腎、睪丸;組織中藥物濃度在4h前,均小于血液中濃度;在24h時(shí)苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)脂肪中含量仍較高;7d時(shí),在心,脾,肺中仍可檢測(cè)到原藥。
　　結(jié)論:證實(shí)了苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)分布廣泛,部分組織可能具有一定的蓄積性,同時(shí)說(shuō)明苯嗪草酮可以通過(guò)血腦屏障和血睪屏障

11、,是否具有神經(jīng)毒性和遺傳毒性還有待于經(jīng)一步研究。
　　第四部分:大鼠對(duì)苯嗪草酮排泄方式研究
　　目的:觀察苯嗪草酮排泄情況,檢測(cè)糞尿中藥物含量隨時(shí)間的變化趨勢(shì)及主要排泄方式。
　　方法:隨機(jī)抽取健康SD雄性大鼠4只,經(jīng)口一次性灌胃染毒后,放入代謝籠,連續(xù)7d同一時(shí)間收集糞尿,糞樣經(jīng)烘干,碾磨,提取,離心,取上清,揮干,復(fù)溶后制備;尿液經(jīng)離心,過(guò)濾后,提取,分離,揮干,復(fù)溶后制備;糞尿樣品通過(guò)HPLC檢測(cè),結(jié)果使用EXC