喹烯酮在鯉體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及殘留研究.pdf

1、喹烯酮為喹噁啉類飼料添加藥物，對(duì)豬、雞等動(dòng)物具有抗病促生長(zhǎng)作用。水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)是重要的食品生產(chǎn)行業(yè)之一。喹烯酮對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有抗菌促生長(zhǎng)，提高成活率的作用，因而具有應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的潛能。本課題在建立鯉血漿、組織中喹烯酮及其兩種主要代謝產(chǎn)物定量分析方法的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)開展了喹烯酮在鯉體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和殘留研究，闡明了喹烯酮在鯉體內(nèi)吸收與分布規(guī)律，確定喹烯酮在鯉體內(nèi)的殘留標(biāo)識(shí)物和靶組織，建立鯉混飼喹烯酮的休藥期標(biāo)準(zhǔn)，為喹烯酮在水產(chǎn)動(dòng)物的應(yīng)用及其食品安

2、全性控制提供科學(xué)依據(jù)。 采用液-液萃取與固相萃取技術(shù)建立了喹烯酮及其主要代謝物在鯉血漿和組織中的高效液相色譜法，并對(duì)方法準(zhǔn)確度、精密度、最低定量限及線性等進(jìn)行了系統(tǒng)考察。結(jié)果表明，喹烯酮及其主要代謝物在鯉血漿中的定量限均為8μg/L，當(dāng)血漿中喹烯酮、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸添加的濃度為8，16，40μg/L時(shí)，回收率為74.92～87.71％，日間變異系數(shù)為7.71～11.24％。線性方程分別為y=3.5515x+

3、1.7055(r=0.9997)，y=2.2042x+80.166(r=0.9993)，y=3.1988x-7.4783(r=0.9997)。由此可見，準(zhǔn)確度和精密度都符合定量分析方法的要求，在所選定的濃度范圍內(nèi)，線性較好。喹烯酮和脫二氧喹烯酮在鯉肌肉中的定量限為4μg/kg，在魚皮中的定量限為10μg/kg，在魚肝中的定量限為20μg/kg。當(dāng)肌肉、魚皮和魚肝中分別添加4，8，16μg/kg，10，20，40μg/kg，20，40，8

4、0μg/kg時(shí)，回收率為74.06～86.31％。日間變異系數(shù)為6.84～14.84％。線性方程分別為喹烯酮在魚肉：y=5.2274x-9.5567(r=0.9996)，喹烯酮在魚皮：y=2.2788x-8.8477(r=0.9993)，喹烯酮在魚肝：y=1.0503x+7.1496(r=0.9992)；脫二氧喹烯酮在魚肉：y=3.8933x-25.092(r=0.9993)，脫二氧喹烯酮在魚皮：y=1.7261x-16.683(r=0

5、.9992)，脫二氧喹烯酮在魚肝：y=0.8662x-5.3659(r=0.9992)。借鑒本實(shí)驗(yàn)室袁宗輝等所建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在豬、雞和魚可食性組織中高效液相色譜法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在鯉的肌肉、魚皮和肝臟中的分析方法的定量限分別為4μg/kg、10μg/kg和10μg/kg，當(dāng)肌肉、魚皮和魚肝中分別添加4，8，20μg/kg，10，20，50μg/kg，10，20，50μg/kg時(shí)，回收率為73.7

6、7～78.54％。日間變異系數(shù)為6.28～11.19％。線性方程分別為y=5.6176x-16.201(r=0.9996)，y=1.5754.x+5.0518(r=0.999).y=1.7735x-14.638(r=0.9995)。由此可見，準(zhǔn)確度和精密度符合定量分析方法的要求，在所選定的濃度范圍內(nèi)，線性較好。 將體重約0.4～0.5kg的健康鯉320尾按體重分成兩組，每組160尾，一組單次靜注喹烯酮2.5mg/kgb.w.，另

7、一組口服喹烯酮200mg/kgb.W.。給藥后分別于不同時(shí)間采集血樣，樣品處理后HPLC檢測(cè)。兩種給藥方式下血漿中均只檢出原形藥物。鯉?kù)o注2.5mg/kgb.w.，藥時(shí)數(shù)據(jù)符合無(wú)吸收二室開放模型。分布半衰期t1/2α為0.32h，消除半衰期t1/2β為11.33h，藥時(shí)曲線下面積AUC為9.65(μg/mL)·h，表明喹烯酮在鯉體內(nèi)分布迅速，消除較慢。鯉口灌200mg/kgb.w.，藥時(shí)數(shù)據(jù)符合有吸收一室開放模型，吸收半衰期t1/2α為

8、2.53h，消除半衰期t1/2e為9.90h，藥時(shí)曲線下面積AUC為1.72(μg/mL)·h，達(dá)峰濃度Cmax為0.08μg/mL，生物利用度F為0.23％，表明鯉口灌喹烯酮后吸收較快，消除較慢，生物利用度低。 將健康鯉190尾連續(xù)飼喂混有75mg/kg喹烯酮的飼料12周后，分別于停藥后4h、12h、24h、48h、72h、5d、7d、10d、14d、21d、28d、35d采樣，各采集點(diǎn)隨機(jī)取樣10尾。剖殺后立即采集皮、肌肉、

9、肝臟，后樣品處理用HPLC檢測(cè)喹烯酮及其代謝產(chǎn)物在肌肉、皮膚、肝臟中的殘留量。結(jié)果表明，停藥后4h、48h和72h，喹烯酮在鯉的皮膚、肝臟和肌肉中的含量已低于定量限；停藥后12h、24h和148h，脫二氧喹烯酮在鯉的肝臟、皮膚和肌肉中的含量即已低于定量限；停藥12h、7d和10d后，3-甲基喹噁啉-2-羧酸在皮膚、肌肉和肝臟中的含量即已低于定量限。本研究結(jié)果表明，喹烯酮及其主要代謝物在鯉所有可食性組織中的消除速度以3-甲基喹噁啉-2-羧

10、酸在肝臟中的半衰期最長(zhǎng)，故確定喹烯酮在鯉體內(nèi)的靶組織為肝臟，殘留標(biāo)識(shí)物為3-甲基喹噁啉-2-羧酸。肝臟中，MQCA濃度在停藥后4h為0.045μg/g，停藥后21d即降到LOD以下，其消除半衰期為3.56d。根據(jù)毒理學(xué)研究，計(jì)算MQCA在肝臟中的MRL為1.8μg/g。本研究表明停藥后4h肝臟中MQCA含量就低于1.8μg/g，據(jù)此確定喹烯酮在鯉體內(nèi)的休藥期為零天。 本文所建立的分析方法靈敏度高，檢測(cè)周期較短，檢測(cè)費(fèi)用較低，同時(shí)