黃芪甲苷-葛根素成分配伍保護(hù)胃粘膜作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的:基于前期已證實(shí)黃芪-葛根藥對(duì)具有保護(hù)乙醇性胃粘膜損傷作用的研究結(jié)果，考察黃芪-葛根藥對(duì)有效成分黃芪甲苷、葛根素及其配伍對(duì)乙醇及吲哚美辛誘導(dǎo)的胃粘膜損傷的保護(hù)及抗氧化作用;分析黃芪甲苷-葛根素成分配伍在胃粘膜保護(hù)的協(xié)同增效作用;初步探討黃芪甲苷-葛根素保護(hù)胃粘膜的抗氧化分子作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.高效液相色譜法測(cè)定黃芪-葛根藥對(duì)中黃芪甲苷、葛根素的含量。黃芪-葛根藥對(duì)(3∶1)按加10倍量水、煎煮30min、重復(fù)

2、3次，水煎濃縮制備。采用高效液相色譜法HPLC-ELSD測(cè)定藥對(duì)水煎液中黃芪甲苷含量，采用HPLC-UV測(cè)定葛根素的含量。
　　2.觀察黃芪甲苷-葛根素配伍、黃芪-葛根藥對(duì)對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響。SD大鼠，分為14組:1）正常組、2）模型組、3）陽性藥組、4）AS-Ⅳ高組（黃芪甲苷高劑量組）、5）AS-Ⅳ中組（黃芪甲苷中劑量組）、6）AS-Ⅳ低組（黃芪甲苷低劑量組）、7）Pur高組（葛根素高劑量組）、8）Pur中組（葛根

3、素中劑量組）、9）Pur低組（葛根素低劑量組）、10）AS中+P中組（黃芪甲苷中劑量配伍葛根素中劑量組）、11) AS中+P低組（黃芪甲苷中劑量配伍葛根素低劑量組）、12）AS低+P中組（黃芪甲苷低劑量配伍葛根素中劑量組）、13）AS低+P低組（黃芪甲苷低劑量配伍葛根素低劑量組）、14）黃芪-葛根藥對(duì)組。除藥對(duì)組采用灌胃外，各組均以腹腔注射給藥，連續(xù)4d。末次給藥75min后，用無水乙醇5ml/Kg灌胃造模，75min后，取胃，觀察胃粘

4、膜損傷分?jǐn)?shù)，病理學(xué)改變，檢測(cè)胃組織超氧化物岐化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量。
　　3.觀察黃芪-葛根藥對(duì)對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響。SD大鼠，分為6組:1）正常組、2）模型組、3）陽性藥組、4）黃芪-葛根藥對(duì)高劑量組、5）黃芪-葛根藥對(duì)中劑量組、6）黃芪-葛根藥對(duì)低劑量組，各組連續(xù)灌胃給藥4d，末次給藥后75min，除正常組外，采用吲哚美辛腹腔注射造模，6h后，取胃，觀察胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)、病理

5、學(xué)改變，檢測(cè)胃組織MDA、SOD、ROS的水平。
　　4.觀察黃芪甲苷-葛根素配伍對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響。SD大鼠，不設(shè)藥對(duì)組，其余分組給藥同實(shí)驗(yàn)2.共13組。末次給藥后75min，以吲哚美辛腹腔注射造模，6h后，取胃，觀察胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)、病理學(xué)改變，檢測(cè)胃組織MDA、SOD、ROS的水平。
　　5.考察黃芪甲苷、葛根素及其配伍、黃芪-葛根藥對(duì)對(duì)胃粘膜組織Kear1-Nrf2-ARE信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白與基因表達(dá)的

6、影響。采用Western-blot、Real timePCR法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)2.及實(shí)驗(yàn)4.大鼠胃粘膜組織核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子(Nr f2)、血紅素加氧酶（HO-1）、NDPH苯醌脫氫酶(NQO1)、谷胱苷肽過氧化物酶2(GPx2)、谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)蛋白及基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.黃芪-葛根藥對(duì)水煎液中含有黃芪甲苷、葛根素，含量分別為1.02 mg/ml、0.058mg/ml，RSD％均小于3％。
　　2.

7、黃芪甲苷-葛根素配伍、黃芪-葛根藥對(duì)對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響。
　　1)形態(tài)學(xué):乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷模型大鼠胃粘膜外觀損傷嚴(yán)重，多見條索狀、點(diǎn)、線狀出血;病理學(xué)顯示模型大鼠胃粘膜組織受到破壞，上皮細(xì)胞固有層分離、胃腺體排列不規(guī)整、胃粘膜下層水腫，核固縮甚至溶解，毛細(xì)血管擴(kuò)張、紅細(xì)胞外滲;給藥各組胃粘膜損傷壞死程度明顯輕于模型組，以AS-Ⅳ高、中組、Pur高組、AS中+P中配伍組改善效果最為明顯。
　　2)胃粘膜損傷分

8、數(shù):給藥各組均能不同程度地降低乙醇誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)，AS-Ⅳ、Pur各自三個(gè)劑量組間存在著一定的量效關(guān)系;AS中+P中配伍組胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)低于各自單獨(dú)給藥。
　　3) SOD、MDA、ROS:乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷模型大鼠胃組織SOD活力下降、MDA、ROS含量上升，給藥各組能不同程度地降低ROS水平，提高SOD活力;與AS-Ⅳ低組、Pur低組比，AS低+P低組SOD活力進(jìn)一步提高，MDA含量進(jìn)一步降低;與AS-Ⅳ低組比，A

9、S低+P低組ROS水平進(jìn)一步降低。
　　3.黃芪-葛根藥對(duì)對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響
　　吲哚美辛誘導(dǎo)的胃粘膜損傷模型大鼠胃粘膜外觀以線狀、點(diǎn)狀出血為主，光鏡下可見胃上皮細(xì)胞變性、脫落，粘膜水腫、出血、炎癥細(xì)胞浸潤及水腫等病理改變，同時(shí)胃組織ROS、MDA含量上升，SOD活力下降;黃芪-葛根藥對(duì)高、中劑量組均能不同程度地改善模型大鼠胃粘膜外觀、病理學(xué)變化，降低胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)及胃粘膜組織MDA、ROS水平。
　

10、　4.黃芪甲苷-葛根素配伍對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷的影響
　　1)形態(tài)學(xué):吲哚美辛45mg/Kg腹腔注射可致大鼠胃粘膜出現(xiàn)明顯糜爛，出血、以線狀、點(diǎn)狀出血為主。病理學(xué)顯示胃小凹結(jié)構(gòu)受損明顯，上皮細(xì)胞變性、脫落、粘膜水腫、出血、胃腺體排列素亂、萎縮、可見炎癥細(xì)胞浸潤，陽性藥組、黃芪甲苷各劑量組、AS中+P低組、AS低+P低組胃粘膜的形態(tài)學(xué)改善作用較為明顯。
　　2)胃粘膜損傷分?jǐn)?shù):陽性藥組、AS-Ⅳ高、中組，AS中+P中

11、組、AS中+P低組、AS低+P低組能明顯降低模型大鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)，AS低+P低組胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)明顯低于Pur低劑量組，亦有低于AS-Ⅳ低組的趨勢(shì)。
　　3) MDA、SOD、ROS:吲哚美辛誘導(dǎo)的胃粘膜損傷大鼠胃組織ROS、MDA含量上升，SOD活力下降;AS-Ⅳ高、中組、AS中+P中組、AS低+P中組、AS低+P低組能明顯降低模型大鼠胃組織MDA的含量;AS-Ⅳ高、中組，Pur高、低組，AS低+P中組、AS低+P低組均能明顯提

12、高模型大鼠胃組織SOD活力;除AS低+P中組，給藥各組均能不同程度降低模型大鼠胃組織ROS含量。
　　5.黃芪甲苷、葛根素及其配伍、黃芪-葛根藥對(duì)保護(hù)胃粘膜損傷的分子機(jī)制。
　　1)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷模型大鼠胃組織細(xì)胞核內(nèi)Nrf2、胃組織HO-1、NQO1、GPx2、GST蛋白和基因表達(dá)升高;AS-Ⅳ中組、Pur中組、AS中+P中組、藥對(duì)組能不同程度地上調(diào)各蛋白和基因的表達(dá)。
　　2)吲哚美辛誘導(dǎo)的胃粘膜損傷模型大鼠

13、胃組織HO-1、NQO1、GPx2、GST蛋白和基因的表達(dá)上升;AS-Ⅳ中組能上調(diào)各基因的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.黃芪-葛根藥對(duì)、黃芪甲苷-葛根素對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷具有保護(hù)作用，能夠抵抗胃粘膜組織的氧化應(yīng)激狀態(tài)，其作用可能與激活Nrf2-ARE通路，促進(jìn)下游抗氧化、解毒相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)有關(guān)。
　　2.黃芪-葛根藥對(duì)、黃芪甲苷對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)的胃粘膜損傷具有保護(hù)作用，能夠抵抗胃粘膜組織的氧化應(yīng)激狀態(tài)。