葛根素對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)帕金森模型的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：帕金森病是一種中老年人常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,以多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性丟失為病理特征。氧化應(yīng)激作為在帕金森病重要的發(fā)病機(jī)制之一,會(huì)造成多巴胺能神經(jīng)元受損死亡。葛根素為中藥葛根中提取的一種活性成分,具有抗氧化及抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用,是否可用于保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元值得探索。因此,本實(shí)驗(yàn)旨在觀察葛根素對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)性作用及其機(jī)制,從而為帕金森病的修飾和保護(hù)治療提供依據(jù)。
　　方法：
　?、寮?xì)胞模型:魚藤酮(Rot,Roteno

2、ne)誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞的PD模型。
　?、費(fèi)TT(噻唑藍(lán))比色法:實(shí)驗(yàn)分組為空白對(duì)照組,魚藤酮(Rot)模型組和不同濃度的葛根素(PUR,Puerarin)藥物處理組(10μM,50μM,100μM,150μM濃度組)。葛根素預(yù)處理24小時(shí)后,魚藤酮再處理24小時(shí)。MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。
　?、诜纸M同上,DCFH-DA按照試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行細(xì)胞熒光染色,分別采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(FCM,flowcytometry)和普

3、通熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)ROS
　　③分組同上,AnnexinV-FITC試劑盒進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)。
　　㈡動(dòng)物模型:
　?、俨捎昧Ⅲw定向儀(stereotaxicapparatus)注射魚藤酮(6μg/μl)于Sprague–Dawley(SD)大鼠右側(cè)黑質(zhì)致密部(substantianigracompactpart,SNc)和腹側(cè)被蓋區(qū)(ventraltegmentalarea,VTA),分為四個(gè)處理組:空白對(duì)照組(D

4、MSO),Rot組,(Rot+PUR50μM)組,(Rot+PUR100μM)組,其中葛根素處理組于第三天APO旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)評(píng)定后,連續(xù)注射7天。
　?、诜炙闹芙o予SD大鼠皮下注射阿樸嗎啡(apomorphine,APO)誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)。
　?、厶幩来笫蠛?免疫熒光染色觀察黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylase,TH),多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(dopaminetransporter,DAT),囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)體2(vesicul

5、armonoaminetransporter2,VMAT2)以及泛素(Ubiquitin,Ub)免疫活性變化。
　　結(jié)果：
　?、寮?xì)胞模型:
　　與單用魚藤酮的模型組相比,(Rot+PUR)處理組(PUR10μM,100μM,150μM)細(xì)胞存活率有顯著升高(P<0.05),(ROT+PUR10μM,50μM)組的ROS(reactiveoxygenspecies)水平下降(P<0.05),(ROT+PUR10μM)組

6、凋亡率下降(P<0.05)。
　?、鎰?dòng)物模型:
　?、貯PO旋轉(zhuǎn)行為學(xué):與立體定向注射魚藤酮后的模型組大鼠相比,魚藤酮造模后給予腹腔注射葛根素(50μM,100μM)組的大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)在第一周和第二周評(píng)定時(shí)有明顯減少(P<0.05)。
　?、诿庖邿晒?與單用魚藤酮組相比,大鼠黑質(zhì)中(Rot+PUR50μM,100μM)組TH,DAT,VMAT2熒光強(qiáng)度增加(P<0.05),Ub熒光強(qiáng)度降低(P<0.05)。
　　結(jié)