番茄紅素納米分散體對(duì)魚藤誘導(dǎo)的SD大鼠帕金森病模型的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　 1.觀察番茄紅素納米分散體對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的SD大鼠帕金森病模型的治療作用及不同劑量番茄紅素納米分散體的作用效應(yīng)差異;
　　 2.探討番茄紅素納米分散體對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的SD大鼠帕金森病模型的治療作用機(jī)制。
　　 [方法]
　　 1.采用乳化蒸發(fā)法制備番茄紅素納米分散體。
　　 2.根據(jù)激光光散射法檢測(cè)樣品平均粒徑和分布。
　　 3.HPLC檢測(cè)番茄紅素納米分散體中番茄紅素含量。<

2、br>　　 4.通過(guò)離心、靜置、不同溫度、光照及金屬離子接觸等方法檢測(cè)番茄紅素納米分散體穩(wěn)定性，通過(guò)對(duì)過(guò)氧化氫和羥基自由基的清除作用研究其體外抗氧化活性。
　　 5.采用隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照及造模組，通過(guò)長(zhǎng)期頸背部皮下注射魚藤酮的方法建立SD大鼠帕金森病模型。模型建立完畢，將篩選出的成功模型大鼠再次隨機(jī)分為美多芭（陽(yáng)性對(duì)照藥）治療組、番茄紅素納米分散體高劑量治療組、番茄紅素納米分散體低劑量治療組、空白乳化劑對(duì)

3、照組、模型組（自然恢復(fù)），每組12只。美多芭組給予美多芭灌胃治療，番茄紅素納米分散體高、低劑量組給予番茄紅素納米分散體灌胃治療，空白乳化劑對(duì)照組給予空白乳化劑灌胃治療，正常對(duì)照組和模型組大鼠給予生理鹽水灌胃治療。
　　 6.治療開(kāi)始前及治療結(jié)束后分別采用網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)、懸掛實(shí)驗(yàn)及跨步實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SD大鼠行為學(xué)變化。
　　 7.大鼠在最后一次治療1天后，經(jīng)麻醉、處死后取腦，每組隨機(jī)取6只剝離黑質(zhì)，經(jīng)免疫組化法檢測(cè)石蠟切片中大鼠中腦黑

4、質(zhì)區(qū)TH陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。其余大鼠分離中腦組織后分別檢測(cè)大鼠中腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量，并采用Western blotting法檢測(cè)各組大鼠黑質(zhì)α-突觸蛋白表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.通過(guò)乳化蒸發(fā)法制備得到的番茄紅素納米分散體的Z-Ave粒徑為230.3 nm，PDI值為0.208，濃度為192μg/ml，其水溶性得到改善，體外抗氧化活性增強(qiáng)。

5、制備得到的番茄紅素納米分散體穩(wěn)定性受紫外光、高溫、Fe3+和Cu2+等金屬離子影響顯著，在低溫、避光條件下保留率較高。
　　 2.行為學(xué)改變:魚藤酮處理使SD大鼠的一般行為學(xué)表現(xiàn)發(fā)生了改變，使用番茄紅素納米分散體可使SD大鼠一般行為學(xué)表現(xiàn)得到一定程度的恢復(fù)。同正常對(duì)照組相比，模型組大鼠在網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)時(shí)間增長(zhǎng)，懸掛實(shí)驗(yàn)中得分降低，跨步數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同模型組（自然恢復(fù)）相比，番茄紅素納米分散體高劑量組

6、及美多芭組在網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)時(shí)間減少，懸掛實(shí)驗(yàn)中得分提高，跨步數(shù)顯著增加（P＜0.05）。番茄紅素納米分散體低劑量組及空白乳化劑對(duì)照組同模型組（自然恢復(fù)）比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　 3.TH陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè):正常對(duì)照組平均TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為107.33±16.74個(gè)，模型組平均TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為48.83±12.83個(gè)，與正常對(duì)照組相比，模型組平均TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少(P＜0.05）。與模型組相比，美多芭組和番茄紅素納米分散體

7、高劑量組平均TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加（P＜0.05），番茄紅素納米分散體低劑量組及空白乳化劑組平均TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)同模型組無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　 4.中腦氧化應(yīng)激水平測(cè)定:同正常對(duì)照組相比，模型組SOD活性和GSH含量下降明顯(P＜0.05)，MDA含量出現(xiàn)明顯上升（P＜0.05）;同模型組相比，納米分散體高劑量組及美多芭組SOD活性明顯上升(P＜0.05)，GSH含量增加(P＜0.05），MDA含量明顯下降(P＜0.0

8、5)，空白乳化劑組與模型組、納米分散體低劑量組差異不明顯，各檢測(cè)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 5.α-突觸核蛋白表達(dá)檢測(cè):正常對(duì)照組α-syn蛋白條帶與內(nèi)參GAPDH蛋白條帶經(jīng)灰度掃描后其灰度值的比值為0.58±0.03，模型組灰度值的比值為1.08±0.05，同正常對(duì)照組相比，模型組α-syn蛋白表達(dá)上升明顯(P＜0.05);同模型組相比，納米分散體高劑量組及美多芭組α-syn蛋白表達(dá)出現(xiàn)一定的下降(P＜0.05)

9、，納米分散體低劑量組α-syn蛋白表達(dá)下降不明顯(P＞0.05)，空白乳化劑對(duì)照組同模型組α-syn蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.經(jīng)乳化蒸發(fā)法制備的番茄紅素納米分散體符合納米化的范疇，其水溶性得到顯著改善，體外抗氧化活性增強(qiáng)。經(jīng)納米化后的番茄紅素在低溫、避光條件下穩(wěn)定性較好，F(xiàn)e3+和Cu2+對(duì)番茄紅素納米分散體穩(wěn)定性影響較大。
　　 2.魚藤酮能引起SD大鼠行為學(xué)改變，出現(xiàn)PD