姜黃素對魚藤酮誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型的保護(hù)作用.pdf

1、背景與目的：
　　帕金森病(parkinson disease，PD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,以黑質(zhì)多巴胺（Dopamine，DA）能神經(jīng)元進(jìn)行性變性死亡為主要病理特征。到目前為止，PD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷在PD的發(fā)病過程中起到了重要的作用。小膠質(zhì)細(xì)胞是氧自由基的一個重要來源，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NA

2、DPH)氧化酶是小膠質(zhì)細(xì)胞的一種重要的調(diào)質(zhì)，是小膠質(zhì)細(xì)胞源性活性氧類物質(zhì)（reactme oxygen species，ROS）的原始來源和小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)促發(fā)炎癥信息的一個機(jī)制。p47phox是NADPH氧化酶的關(guān)鍵亞基，p47phox在小膠質(zhì)細(xì)胞源性ROS的形成中發(fā)揮著重要作用。
　　Sirtuins家族是一組依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）的去乙?；?，在哺

3、乳類中表達(dá) SIRT1到 SIRT7七種亞型，沉默信息調(diào)節(jié)因子3（silent information responsor type3，SIRT3）是唯一與人類老化相關(guān)的Sirtuins家族成員，是一個定位于線粒體基質(zhì)內(nèi)的蛋白，與線粒體的代謝密切相關(guān)。過度表達(dá) SIRT3已經(jīng)被證實可以提高細(xì)胞的呼吸作用和降低ROS的產(chǎn)出。
　　姜黃素是從姜黃根莖中提取的一種酚性色素,是姜黃的重要活性成分,具有抗氧化、抗炎、清除自由基等廣泛的藥理作

4、用，還能夠調(diào)節(jié)和抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)和遷移。研究顯示，姜黃素能夠通過促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子Nrf2(Nuclear factorerythroid2-related factor)的表達(dá)減少細(xì)胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)的產(chǎn)生，從而延緩細(xì)胞的衰老或凋亡。SIRT3在對抗氧化應(yīng)激中起重要作用，但是姜黃素能否通過SIRT3抑制P47phox表達(dá)減少小膠質(zhì)細(xì)胞源性ROS從而參與PD的神經(jīng)保護(hù)目前仍缺乏相關(guān)研究。
　　為此，本研究選擇姜黃素治療魚藤酮誘導(dǎo)的慢性

5、PD SD大鼠模型，觀察SD大鼠行為學(xué)變化，ROS含量，SIRT3 mRNA、P47phox mRNA含量及SIRT3、P47phox的表達(dá)情況，探討姜黃素對PD大鼠的保護(hù)作用及SIRT3所介導(dǎo)的具體機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　清潔級雄性SD大鼠40只，按隨機(jī)區(qū)組法分為溶劑對照組、姜黃素組、魚藤酮組、治療組，每組10只。采用頸背部皮下注射魚藤酮28天制備慢性PD SD大鼠模型，并進(jìn)行行為學(xué)評價及mN

6、SS評分驗證，模型制備成功后，再給予姜黃素灌胃治療28天。
　　采用懸尾實驗觀察大鼠行為學(xué)變化，Western-blot法檢測大鼠腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3、P47phox的表達(dá)，RT-PCR檢測大鼠腦黑質(zhì)區(qū) SIRT3 mRNA、P47phox mRNA含量，流式細(xì)胞儀檢測大鼠腦黑質(zhì)ROS含量。
　　結(jié)果：
　　1.懸尾實驗：4組大鼠掙扎次數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組大鼠掙扎次數(shù)少于溶劑對照組、姜黃素組

7、，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組大鼠掙扎次數(shù)少于溶劑對照組、姜黃素組，多于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對照組與姜黃素組大鼠掙扎次數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2. Western-blot檢測 SIRT3蛋白表達(dá)：4組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3表達(dá)水平低于溶劑對照組、姜黃素組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組

8、腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3表達(dá)水平低于溶劑對照組、姜黃素組，高于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對照組與姜黃素組腦黑質(zhì)區(qū) SIRT3表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3. Western-blot檢測 P47phox蛋白表達(dá)：4組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)P47phox表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組腦黑質(zhì)區(qū)P47phox表達(dá)水平高于溶劑對照組、姜黃素組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組腦黑

9、質(zhì)區(qū)P47phox表達(dá)水平高于溶劑對照組、姜黃素組，低于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對照組與姜黃素組腦黑質(zhì)區(qū)P47phox表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4. RT-PCR檢測SIRT3 mRNA含量：4組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3 mRNA含量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3 mRNA含量低于溶劑對照組、姜黃素組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組腦黑質(zhì)

10、區(qū)SIRT3 mRNA含量低于溶劑對照組、姜黃素組，高于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對照組與姜黃素組腦黑質(zhì)區(qū)SIRT3 mRNA含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5. RT-PCR檢測P47phox mRNA含量：4組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)P47phox mRNA含量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組腦黑質(zhì)區(qū) P47phox mRNA含量高于溶劑對照組、姜黃素組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.

11、05）；治療組腦黑質(zhì)區(qū)P47phox mRNA含量高于溶劑對照組、姜黃素組，低于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對照組與姜黃素組腦黑質(zhì)區(qū)P47phox mRNA含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.流式細(xì)胞儀檢測ROS含量：4組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)ROS含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。魚藤酮組大鼠腦黑質(zhì)區(qū) ROS含量高于溶劑對照組、姜黃素組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)

12、ROS含量高于溶劑對照組、姜黃素組，低于魚藤酮組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。溶劑對照組與姜黃素組大鼠腦黑質(zhì)區(qū)ROS含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7. SIRT3蛋白表達(dá)和P47phox蛋白表達(dá)相關(guān)分析：溶劑對照組及姜黃素組SIRT3蛋白與P47phox蛋白之間不存在線性相關(guān)（P>0.05），魚藤酮組及治療組SIRT3蛋白與P47phox蛋白之間存在線性相關(guān)（P<0.05），且為負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：