食管鱗癌中RASSF7的表達及其臨床意義.pdf

1、目的:食管癌是常見的人類消化道腫瘤之一，嚴重威脅著人類健康，是全球關注的公共衛(wèi)生事件之一。中國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，近年來食管癌的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，然而其具體發(fā)病機制尚未完全明確。大多認為是由生物、化學以及遺傳等多因素引起的多基因改變、多階段累積的復雜病理過程。研究其發(fā)病機制并控制其發(fā)生發(fā)展，改善人類健康狀況是目前亟待解決的問題。
　　RAS相關區(qū)域家族(Ras-association domain family,

2、 RASSF)共包含10名成員，RASSF1～10。該家族又分為兩組，傳統(tǒng)的RAS SF1～6和N-末端成員RASSF7～10。RASSF7位于11p15.5，有6個外顯子，由于選擇性剪切的作用形成3個亞型，分別是RASSF7A、RASSF7B和RASSF7C，分別編碼320、337和373個氨基酸。
　　目前關于RAS相關結構域家族基因1A(RAS association domainfamily gene1A，RASSF1A)

3、在食管癌中的各種研究較為深入。然而有關RASSF7在食管鱗癌的研究尚未見報道。本研究通過檢測69例食管鱗癌組織、相應癌旁正常組織和5-aza-dC處理前后4株食管癌細胞系中RASSF7mRNA表達情況及甲基化狀態(tài)，以及應用免疫組織化學SP法檢測69例食管癌組織和相應癌旁正常組織中RASSF7的蛋白表達情況，探究其與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的關系。
　　方法:
　　1、應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcriptio

4、n polymerase chainreaction，RT-PCR)技術分別檢測DNA甲基轉移酶抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine，5-aza-dC)處理前后的食管癌細胞系(TE13、T.Tn、YES-2、Ec109)和69例食管鱗癌組織及其相應癌旁正常組織中RASSF7基因mRNA表達水平。
　　2、應用免疫組織化學(immunohistochemistry, IHC) SP法檢測69例

5、食管鱗癌組織及其相應癌旁正常組織中RASSF7蛋白的表達情況。
　　3、應用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction，MSP)技術分別檢測應用5-aza-dC處理前后的食管癌細胞系和69例食管鱗癌組織及其相應癌旁正常組織中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)。
　　4、運用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　結果:
　　1、食管癌細

6、胞系中RASSF7的mRNA表達情況及甲基化狀態(tài)
　　1.15-aza-dC處理前后食管癌細胞系中RASSF7的mRNA表達
　　未處理的四株食管癌細胞株中，TE13、T.Tn、YES-2細胞株中RASSF7基因mRNA表達呈陽性，Ec109細胞株中RASSF7基因表達缺失，應用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后，TE13、T.Tn、YES-2細胞株中RASSF7基因表達下調(diào)，Ec109細胞株中檢測出RASSF7 mRNA的

7、表達。
　　1.25-aza-dC處理前后的食管癌細胞系中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)
　　應用甲基化抑制劑5-aza-dC處理前后的4株食管癌細胞系中均未檢測到RASSF7基因的異常甲基化狀態(tài)。
　　2、食管鱗癌組織中RASSF7基因的表達水平、甲基化狀態(tài)以及與臨床病理學資料之間的關系
　　2.1食管鱗癌組織中RASSF7基因mRNA的表達
　　RASSF7基因mRNA在食管鱗癌組織中的相對表達量(0.6

8、3±0.08)顯著高于相應癌旁正常組織(0.42±0.20)，兩者差異具有統(tǒng)計學意義(t=8.184，P=0.000)。在食管鱗癌患者中，RASSF7的mRNA表達與患者的淋巴結轉移情況(P=0.000)及腫瘤組織分化程度(P=0.000)有關，而與腫瘤組織的分期(P=0.116)以及患者的年齡（P=0.167）、性別(P=0.615)無關。2.2食管鱗癌組織中RASSF7基因蛋白的表達
　　69例食管鱗癌組織中，RASSF7基因

9、的蛋白表達陽性率(81.2％，56/69)顯著高于相應癌旁正常組織(53.6％，37/69)，兩者差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。在食管鱗癌中，RASSF7基因蛋白表達與患者的淋巴結轉移情況（P=0.009）和腫瘤組織的分化程度有關（P=0.000），而與年齡(P=0.707)、性別(P=0.772)以及腫瘤組織的分期(P=0.630)無關。
　　2.3食管鱗癌組織中RASSF7基因的甲基化狀態(tài)
　　啟動子區(qū)遠端及啟動

10、子區(qū)近端的3對甲基化引物在69例ESCC組織及相應癌旁正常組織中均未檢測到RASSF7的甲基化。
　　2.4 RASSF7基因mRNA和蛋白表達之間的關系
　　在RASSF7基因蛋白表達陽性的食管鱗癌組織中，其mRNA的相對表達量為0.65±0.07，RASSF7基因蛋白表達陰性的食管鱗癌組織中，其mRNA相對表達量為0.54±0.04，兩者的差異具有統(tǒng)計學意義(t=7.144，P=0.000＜0.05)。
　　結論: