黑豆多糖的提取、結(jié)構(gòu)及其對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、黑豆中不僅含有豐富的營養(yǎng)成分，還具有抗氧化、抗炎、抗肥胖、抗糖尿病和抗突變以及抑制低密度脂蛋白的氧化和減少DNA損傷等多種生物活性。本研究采用水提法提取黑豆多糖，并對(duì)其最優(yōu)提取條件、分離純化、結(jié)構(gòu)表征、抗氧化活性及其護(hù)肝活性等進(jìn)行系統(tǒng)研究。
　　(1)通過單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)曲面法對(duì)黑豆多糖的提取條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明，黑豆多糖最佳的提取條件為:液料比為15 ml/g，提取時(shí)間為6.4 h，提取溫度為92℃，相應(yīng)的最高提取率為2.5

2、6％。
　　(2)通過DEAE-纖維素離子交換色譜柱和Sephadex CL-4B瓊脂糖凝膠色譜柱將黑豆多糖分離純化成三個(gè)組分BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3，并采用高效體積排阻色譜法測定多糖純組分的分子量為1.95×105 Da、3.46×105Da和1.88×105 Da。
　　(3)通過多種儀器分析法對(duì)黑豆多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。多糖溶液的紫外掃描結(jié)果表明BSPS-1、BSPS-2和BSPS-3在260-280 n

3、m的波長范圍內(nèi)無最大吸收，說明多糖樣品中無核酸和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。多糖的紅外光譜分析結(jié)果表明，BSPS-1在1916 cm-1和762 cm-1處的吸收峰說明其具有典型的吡喃葡萄糖殘基;而BSPS-2和BSPS-3在1076 cm-1和1043 cm-1處的峰說明其具有吡喃半乳糖和阿拉伯呋喃糖殘基。采用三甲基硅醚衍生化法對(duì)多糖樣品的單糖組成進(jìn)行分析，結(jié)果表明BSPS-1主要由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖組成，其摩爾比為1.79∶

4、1.00∶2.59∶26.54∶1.01;BSPS-2主要由阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、甘露糖和半乳糖組成，其摩爾比為8.10∶4.80∶9.15∶13.38∶1; BSPS-3主要由阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖組成，其摩爾比為16.80∶3.6∶33.66∶1。甲基化和GC-MS的結(jié)果表明，BSPS-1主要是由→6)-Glcp-(1→構(gòu)成的;而BSPS-3的主鏈?zhǔn)怯伞?)-β-D-Galp-（1→構(gòu)成，而T-α-LAraf-(1→、→

5、5)-洳L-Araf-（1→、→2）-α-L-Rhap-（1→和4-O-Me-β-D-GlcAp-(1→與→3)-β-D-Galp-(1→等其他殘基則位于側(cè)鏈。1D和2D NMR進(jìn)一步表明，BSPS-1是線性的(1→6)--D-葡聚糖，而BSPS-3是Ⅱ型阿拉伯半乳聚糖。
　　(4)對(duì)黑豆多糖的體外抗氧化活性和護(hù)肝作用進(jìn)行了研究。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明，粗BSPS和其純化組分具有較強(qiáng)的超氧陰離子自由基和DPPH自由基清除活性，其體外抗

6、氧化活性大小的順序?yàn)?粗BSPS＞BSPS-3＞BSPS-2＞BSPS-1。體內(nèi)護(hù)肝活性實(shí)驗(yàn)表明，相比于四氯化碳模型組，黑豆多糖處理組不僅可以顯著抑制血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶水平的升高，而且可以顯著提高肝組織中超氧化物岐化酶、過氧化物酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽和總抗氧化能力的水平;此外，還可以顯著降低肝組織中的丙二醛水平，而高劑量組黑豆多糖的護(hù)肝效果可與水飛薊素相媲美。研究結(jié)果表明，黑豆多糖具