杏鮑菇三萜類化合物提取純化工藝及抑制腫瘤活性研究.pdf

1、杏鮑菇（Pleurotus eryngii）是一類品質(zhì)優(yōu)良的大型肉質(zhì)傘菌，其味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)成分均衡，是近年來開發(fā)栽培成功的集食用和藥用于一體的珍稀食用菌新品種。本論文以杏鮑菇的甲醇提取物為原料，相繼用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到三種不同提取物。在前期模型鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明灌胃一定量的杏鮑菇三萜類提取物可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞增殖且存在劑量效應(yīng)關(guān)系的基礎(chǔ)上，本論文分離純化三萜化合物含量較為豐富的乙酸乙酯提取物，鑒定三萜各組成單體，確定其分子

2、結(jié)構(gòu)，并比較各單體抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用，解析其結(jié)構(gòu)及功能基團(tuán)對(duì)抑制腫瘤活性的影響，系統(tǒng)深入地研究了杏鮑菇三萜化合物的組成和構(gòu)效關(guān)系，為杏鮑菇在功能性食品領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。主要結(jié)論如下：
　　1.香草醛-冰醋酸顯色比色法測(cè)定杏鮑菇三萜的最佳實(shí)驗(yàn)條件為：加入待測(cè)樣品后，加熱揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸溶液0.8mL，60℃條件下水浴15min后加入5mL冰醋酸，靜置10min，于

3、547nm處測(cè)定其吸光值，在此條件下進(jìn)行的比色試驗(yàn)具有較高的顯色靈敏度。
　　2.超聲波輔助浸提杏鮑菇三萜的工藝參數(shù)為：提取時(shí)間30min，功率150W，料液比1:3。與甲醇浸提處理8h的實(shí)驗(yàn)組相比，超聲波輔助浸提法使三萜提取率由1.02%提高至2.67%。
　　3.杏鮑菇不同溶劑的萃取物中三萜類化合物的含量不盡相同，其中乙酸乙酯萃取物中三萜類化合物含量較為豐富，達(dá)到131.47±0.73mg·g-1。利用硅膠柱層析法、凝膠

4、色譜層析法和制備型薄層色譜法等分離純化技術(shù)對(duì)乙酸乙酯層提取物進(jìn)行分離純化，并結(jié)合薄層色譜法對(duì)純化的樣品進(jìn)行定性分析，獲得3種三萜類化合物單體1-3。對(duì)其進(jìn)行核磁共振檢測(cè)和質(zhì)譜分析，鑒定單體物質(zhì)分別為：2，3，6，23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸（化合物1），2，3，23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸（化合物2）和羽扇豆醇（化合物3）。此三種物質(zhì)均首次從杏鮑菇菌體中分離得到。
　　4.MTT結(jié)果顯示，杏鮑菇乙酸乙酯提取物中分離

5、純化所得的3種三萜類化合物能顯著抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和卵巢癌SK-OV-3細(xì)胞株的增殖，且在一定濃度范圍內(nèi)存在劑量效應(yīng)關(guān)系。相同濃度條件下，3種化合物對(duì)MCF-7腫瘤細(xì)胞的抑制作用顯著強(qiáng)于對(duì)SK-OV-3腫瘤細(xì)胞的抑制作用。對(duì)于同種腫瘤細(xì)胞，化合物的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性為化合物1>化合物2>化合物3。其對(duì)腫瘤細(xì)胞MCF-7的IC50值分別為15.71μM，48μM和66.89μM，對(duì)SK-OV-3細(xì)胞的IC50值分別為67.98μ