He-Ne激光和增強UV-B輻射對小麥幼苗微管結(jié)合蛋白MAP65s的影響.pdf

1、微管結(jié)合蛋白與微管特異地結(jié)合在一起，參與調(diào)節(jié)微管的結(jié)構(gòu)與功能，目前已成為植物細胞骨架研究的前沿領(lǐng)域。MAP65s是一類植物所特有的，在進化上保存下來的微管結(jié)合蛋白。本研究以“ML7113”小麥為材料，通過免疫印跡實驗鑒定小麥幼苗中微管結(jié)合蛋白MAP65s的存在并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法初步探究了體外MAP65s對微管聚合的影響，為進一步研究MAP65s蛋白的生理功能提供了重要的依據(jù)。在此基礎(chǔ)上，本研究分別對CK組（對

2、照組）、B組(UV-B處理組)、L組（He-Ne激光處理組）、BL組（UV-B和He-Ne激光復(fù)合處理組）小麥幼苗的MAP65s進行提取，并通過測定各處理組中小麥幼苗MAP65s的含量，來研究He-Ne激光和增強UV-B輻射對小麥幼苗MAP65s的影響。另外，本研究采用間接免疫熒光標記技術(shù)和激光共聚焦掃描顯微系統(tǒng)分別對CK組和B組中MAP65s和染色體進行雙標記，用以探究小麥體細胞內(nèi)MAP65s與染色體分布的相關(guān)性，初步探討MAP65s

3、與“分束分裂”的關(guān)系。結(jié)果表明:
　　 (1)利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)檢測蛋白條帶后，發(fā)現(xiàn)目的蛋白條帶清晰，分子量為65KD左右;免疫印跡結(jié)果表明，65KD左右的條帶確實為MAP65s，從而確定在小麥幼苗中存在MAP65s。
　　 (2)對不同日齡小麥幼苗葉片和根中的MAP65s含量進行測定，發(fā)現(xiàn)7日齡小麥葉片和根中MAP65s含量均較多，進而選擇7日齡小麥幼苗為后續(xù)實驗的最佳材料。
　　 (3)共沉淀

4、實驗結(jié)果顯示，MAP65s可與微管結(jié)合，具有一般微管結(jié)合蛋白的基本特性;濁度法實驗顯示，MAP65s對微管聚合的影響與其濃度相關(guān)，低濃度促進微管聚合，高濃度則抑制微管聚合。
　　 (4)經(jīng)UV-B輻射處理(B)后，小麥幼苗中的MAP65s含量低于對照組(CK)(P＜0.01);單獨He-Ne激光(L)處理，MAP65s含量高于對照組(CK)(P＜0.05);經(jīng)He-Ne激光和UV-B復(fù)合處理(BL)后，MAP65s含量高于UV-

5、B處理組，低于CK組。該結(jié)果表明:一定劑量的He-Ne激光輻照能夠促進小麥幼苗微管結(jié)合蛋白MAP65s的合成，并且可能在一定程度上緩解增強UV-B輻射對小麥幼苗微管骨架系統(tǒng)造成的損傷。
　　 (5)增強UV-B輻射導(dǎo)致小麥根尖分生區(qū)細胞出現(xiàn)“不均等分裂”、“染色體單橋”、“染色體雙橋”等異常分裂現(xiàn)象。
　　 (6)與對照組相比，增強UV-B輻射處理的小麥根尖細胞中MAP65s的熒光變暗，強度減弱，可推測MAP65s在增強