增強(qiáng)UV-B輻射和He-Ne激光輻照對小麥CENPA和一氧化氮合成相關(guān)酶的影響.pdf

1、近年來，關(guān)于CENPA的結(jié)構(gòu)與功能受到了人們的普遍關(guān)注，其中CENPA的表達(dá)或結(jié)構(gòu)異常與細(xì)胞分裂過程中的染色體分離異常之間的關(guān)系已經(jīng)成為人們研究CENPA功能的熱點(diǎn)問題。本文以‘臨優(yōu)2018’小麥為材料，分別用直接酸抽提法、酸抽提-乙醇沉淀法、酸抽提-三氯乙酸沉淀法提取小麥中的CENPA，并應(yīng)用bradford法、SDS-PAGE及間接免疫熒光技術(shù)對其進(jìn)行定量、檢測及鑒定。比較這三種不同的提取方法尋找適合小麥CENPA的提取方法。在此基

2、礎(chǔ)上，我們確定采用直接酸抽提法分別對CK組(對照組)、B組(UV-B輻射組)、BL組(UV-B和激光復(fù)合處理組)、L組(激光處理組)小麥幼苗的CENPA進(jìn)行提取，并測定了不同處理天數(shù)下各處理組小麥幼苗CENPA的含量，來研究增強(qiáng)UV-B輻射和He-Ne激光對小麥幼苗CENPA的影響，初步探討CENPA與異常分裂的關(guān)系。另外，本研究還對各處理組小麥幼苗根的一氧化氮合成酶(NOS)和硝酸還原酶(NR)進(jìn)行了提取、定量及比較分析，來研究增強(qiáng)U

3、V-B輻射和He-Ne激光對小麥幼苗CENPA的影響，初步探討一氧化氮合成相關(guān)酶對UV-B脅迫的響應(yīng)機(jī)制。結(jié)果表明：
　　 (1)直接酸抽提法提取小麥CENPA，操作簡單，提取效率高；電泳結(jié)果顯示，其雜質(zhì)干擾少、條帶清晰、分辨率高、目的蛋白得率適中。免疫印跡結(jié)果表明，17kd左右的條帶確實(shí)為CENPA蛋白。確定采用直接酸抽提法作為后續(xù)實(shí)驗小麥CENPA的提取方法。
　　 (2)實(shí)驗處理五天時，增強(qiáng)UV-B輻射和He-Ne

4、激光輻照對小麥幼苗根和葉中的CENPA含量有明顯的影響且影響效果基本相同。經(jīng)UV-B輻射后，小麥幼苗根和葉中CENPA含量較對照組均有很大程度的下降(P<0.01)，表現(xiàn)為一定的抑制作用。單獨(dú)的He-Ne激光處理后，小麥根和葉中的CENPA含量相對于對照組無顯著差異(P>0.05)，說明He-Ne激光輻照對小麥CENPA含量沒有不利影響。經(jīng)He-Ne激光和UV-B輻射復(fù)合處理后，小麥幼苗根和葉中的CENPA含量明顯高于B組，并接近CK組

5、，表現(xiàn)為一定的促進(jìn)作用，說明He-Ne激光能促進(jìn)UV-B輻射后CENPA蛋白的合成，使其含量升高。
　　 (3)增強(qiáng)UV-B輻射后，小麥幼苗根中一氧化氮合成酶(NOS)含量明顯增多；單獨(dú)He-Ne激光處理后，NOS含量相對于對照組顯著增多；而UV-B輻射與He-Ne激光輻照復(fù)合處理后，NOS含量高于對照組同時也高于B組，說明He-Ne激光能進(jìn)一步促進(jìn)UV-B輻射后NOS的合成，提高小麥對UV-B輻射的抗性。
　　 增強(qiáng)U