游離脂肪酸致胰島素抵抗的機(jī)制研究.pdf

1、胰島素抵抗（IR）是大部分2型糖尿病（T2DM）的主要代謝紊亂，在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)流行性的發(fā)病趨勢(shì)。IR由一系列生理因素的改變導(dǎo)致，其中包括胰島素受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)缺陷、線粒體功能障礙、微脈管功能障礙和炎癥作用等。這些改變導(dǎo)致肝臟和骨骼肌特異性脂質(zhì)代謝物（甘油二脂和/或神經(jīng)酰胺）的積累，最終損傷胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致IR。血清中游離脂肪酸（FFA）水平升高是脂肪代謝異常的典型表現(xiàn)，也是肥胖引起的 IR的主要因素之一。目前的研究表明FFA致IR的機(jī)

2、制包括了氧化應(yīng)激、炎癥作用、凋亡、線粒體功能障礙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等，涉及的分子主要包括JNK（Jun N-尾激酶）、ROS（活性氧）、PKCδ（蛋白激酶C-δ）、NLRP3（核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3）等。但大部分的研究都是在細(xì)胞和動(dòng)物模型中進(jìn)行的，同時(shí)涉及的分子數(shù)量有限，信號(hào)通路單一，因此，本研究從前期糖尿?。≒re-DM）和T2DM患者血清中FFA與IR的關(guān)系研究出發(fā)，通過對(duì)FFA水平異常升高的IR患者與FFA水平正常的健康體檢

3、人群的血液樣本進(jìn)行胰島素信號(hào)通路基因芯片分析，篩選參與FFA致IR疾病過程的與胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)的差異表達(dá)基因，尋找可能的致病分子，從而為早期診斷及疾病治療提供分子靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
　　本研究收集在蘭州總醫(yī)院入院治療并診斷為T2DM的患者154例、體檢中心體檢人群中被診斷為Pre-DM的患者39例、以及體檢中心體檢的健康人33例，按相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)將T2DM分為T2DM肥胖組（O組）、T2DM非肥胖組（N組），將Pre-DM分為空

4、腹血糖受損組（IFG組）和糖耐量受損組（IGT），健康對(duì)照組為NC組。測(cè)定入選者的基本體質(zhì)指標(biāo)、生化指標(biāo)、內(nèi)分泌指標(biāo)和血清FFA水平，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR），用t檢驗(yàn)、非參數(shù)秩和檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析和多元線性回歸分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。然后在O組、N組和NC組中分別篩選符合條件的病例共10例，提取外周血中的mRNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行基因芯片檢測(cè)，篩選差異表達(dá)基因。最后將篩選出的與FFA致IR的相關(guān)差異表達(dá)基因DO

5、K1，在T2DM和Pre-DM中其他符合條件的樣品中進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，分析表達(dá)情況，驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的可靠性。
　　本研究結(jié)果表明：（1） T2DM組、N組以及O組的FFA水平和HOMA-IR均顯著高于NC組；在N組中，HOMA-IR與FFA存在正相關(guān)關(guān)系，隨著FFA的增加，HOMA-IR增大，F(xiàn)FA對(duì)HOMA-IR的影響較大。（2）IFG組、IGT組和Pre-DM組中FFA和HOMA-IR均顯著高于 NC組；Pre-DM患

6、者 HOMA-IR與 FFA正相關(guān)關(guān)系，隨著 FFA的增加，HOMA-IR增大，同時(shí)FFA對(duì)HOMA-IR的影響最大。（3）基因芯片分析結(jié)果表明O組與NC組相比，基因FOS（FBJ鼠科動(dòng)物骨肉瘤病毒致癌基因同系物）顯著下調(diào)，差異倍數(shù)為3.58；N組與NC組相比，基因Fos、己糖激酶2（HK2）、銜接蛋白1（DOK1）顯著下調(diào)，差異倍數(shù)分別為10.71、2.32、2.22；O組與N組相比，基因FOS、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK1）顯著上

7、調(diào)，基因AE結(jié)合蛋白1（AEBP1）顯著下調(diào)的，差異倍數(shù)分別為2.72、1.77、1.79。（4）熒光定量PCR分析各實(shí)驗(yàn)組中DOK1表達(dá)水平的結(jié)果表明與NC組相比，N組和Pre-DM組的DOK1表達(dá)顯著降低，T2DM-O組的DOK1表達(dá)并無(wú)顯著變化。
　　綜上所述推測(cè)，對(duì)于T2DM中的非肥胖患者以及前期糖尿病的患者來說，血清FFA水平的異常升高可能與DOK1的顯著下調(diào)有關(guān)，同時(shí)可能通過下調(diào)DOK1的表達(dá)，抑制脂肪合成，促進(jìn)脂肪分