C-端序列分析方法學(xué)研究與HWAP-I生物活性方面的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)序列分析是蛋白質(zhì)研究中的核心技術(shù).N端測序已經(jīng)成為十分完善的技術(shù),并已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了自動化.C端與N端一樣,在蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)分析中具有重要地位,不僅對N端封閉的蛋白質(zhì)進(jìn)行序列測定,而且對基因克隆具有指導(dǎo)意義.盡管Schlack-Kumpf降解法的研究進(jìn)展緩慢,但是近十年研究表明該方法是很有希望成為C端順序測定的常規(guī)方法.在蛋白質(zhì)C端(異)硫氰酸法順序測定技術(shù)中,標(biāo)準(zhǔn)氨基酸乙內(nèi)酰硫脲(TH-AA)的制備是必須首先要解決的問題.該文以L-型

2、氨基酸為原料,采用乙酸酐做活化試劑,TBS-ITC為偶聯(lián)試劑,制備了20種TH-AA,反應(yīng)產(chǎn)物通過RP-HPLC進(jìn)行了分離純化.該文同時在偶聯(lián)試劑方面進(jìn)行了探索,采用合成的13肽(NH2-KKESDFLMFVYLV-COOH)為模型肽,并偶聯(lián)到DITC玻璃珠上進(jìn)行了方法學(xué)研究.通過實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化對C-端序列分析的化學(xué)方法進(jìn)行了微量化探索,在0.5nmol規(guī)模可獲得三個氨基酸C-端序列信號.改變偶聯(lián)試劑的濃度發(fā)現(xiàn)在0.2mol/L可獲得最