蠶蛹活性多肽的制備及降血壓、降血糖活性研究.pdf

1、蠶蛹(silkwormpupae)，是家蠶上蔟結(jié)繭后4天左右所形成的產(chǎn)物，是繅絲工業(yè)的副產(chǎn)品。我國是養(yǎng)蠶大國，蠶蛹產(chǎn)量很大，但由于缺乏深加工技術(shù)，基本上都被用作飼料，資源利用率低。但是，干蠶蛹的營養(yǎng)卻很豐富，其中粗蛋白質(zhì)含量高達50％，油脂含量高達25％～30％，還含有多種維生素，微量元素以及甲殼素、抗菌肽、多糖等，是“作為普通食品管理的新資源名單”中唯一上榜的昆蟲類。因此，加大對蠶蛹的開發(fā)力度具有重要的意義和廣闊的前景。
　　

2、 “三高癥”是指高血壓、高血糖（即糖尿?。┖透咧Y。它們是現(xiàn)代社會派生出來的“富貴病”，或單獨存在，或相互關(guān)聯(lián)。譬如:糖尿病人很容易同時患上高血壓或高血脂癥，而高血脂又是動脈硬化形成和發(fā)展的主要因素，動脈硬化患者血管彈性差加劇血壓升高。所以，當出現(xiàn)這三種病癥中的任何一種，后期都易形成“三高癥”。高血壓和高血糖的危險性不可小覷，目前臨床常用的降血壓藥物有很多種，它們治療高血壓的效果十分顯著，但是長期服用易引起皮疹、泌尿系統(tǒng)病變等副作用;

3、而糖尿病治療的化學類藥物也存在毒副作用大這一難題?；谑袌鰧Π踩?、方便、有效的降血壓、降血糖藥物的迫切需要，人們便把目光投向了天然降血壓、降血糖物質(zhì)。
　　 本文的研究工作主要側(cè)重于蠶蛹蛋白活性多肽的制備和它在動物體內(nèi)的活性探究。首先選擇適合的蛋白酶對經(jīng)過脫脂處理的蠶蛹蛋白進行雙酶解，先進行單因素實驗，再通過設(shè)計響應(yīng)面優(yōu)化實驗，隨后采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠、半制備液相色譜技術(shù)對蠶蛹活性多肽進行分離純化，最后在動物體內(nèi)進行活性測定

4、，有望進一步開發(fā)成降血壓、降血糖藥物或者功能性保健品。這樣一來，既能避免蠶蛹作為繅絲副產(chǎn)品的資源浪費，也能促進對蠶蛹蛋白資源的進一步利用。本文由國家桑蠶產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系“蠶桑大宗資源深度利用關(guān)鍵技術(shù)與產(chǎn)業(yè)化規(guī)范”項目提供資金支持，是該項目的部分研究內(nèi)容，主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)蛋白酶水解選擇及優(yōu)化實驗
　　 本實驗選擇中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶5種蛋白酶對脫脂處理后的蠶蛹蛋白進行雙酶解效

5、果實驗，以水解度(DH)和血管緊張素酶(ACE)抑制率作為考察指標，最終得到的結(jié)果是，以堿性蛋白酶和復(fù)合性蛋白酶雙酶解制備出的蠶蛹活性多肽ACE抑制率最高，達到38.09％。
　　 在響應(yīng)面優(yōu)化實驗之前進行了酶解時間、pH、底物濃度、加酶量、反應(yīng)溫度這五個因素的單因素實驗，在此基礎(chǔ)上再進行響應(yīng)面優(yōu)化實驗，最終得到最佳的酶解條件為:酶解時間3.5h，底物濃度10.12％，溫度50.22℃，pH8.5，加酶量7.03％。
　　

6、 (2)大孔樹脂、葡聚糖凝膠及半制備RP-HPLC純化分離純化蠶蛹活性多肽的實驗
　　 本實驗選擇大孔樹脂DA201-C首先進行脫色脫鹽處理，上樣流速為0.5ml/min，洗脫劑為75％的乙醇，洗脫流速為2.0ml/min。
　　 將大孔樹脂分離得到的解析液，再經(jīng)過SephadexG-25和SephadexLH-20純化，出現(xiàn)5個峰，其ACE抑制率分別為:P1-24.82％，P2-22.37％，P3-32.64％，P4

7、-34.82％，P5-44.37％，因此選擇P5進行下一步實驗。
　　 將峰P5的組分進行半制備HPLC分析，取色譜圖中分離較好的幾個組分，測定其ACE抑制率，并用SDS-PAGE電泳法測其分子量范圍。
　　 (3)蠶蛹活性多肽的體內(nèi)降血壓活性探究
　　 本實驗選擇自發(fā)性高血壓模型大鼠為實驗動物，采取卡托普利為對照藥物，將葡聚糖凝膠純化后的多肽液冷凍干燥后按一定劑量進行一次性和長期給藥，實驗結(jié)果表明，實驗所提取的