NFAR1穩(wěn)定IL-2mRNA上游調(diào)節(jié)機制的研究.pdf

1、CD28所誘導(dǎo)的白細胞介素(IL-2)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控被認為是與IL-2 mRNA3’UTR區(qū)的富集腺嘌呤尿嘧啶保守區(qū)域(AU-rich elements，AREs)相關(guān)的。與ARE結(jié)合的蛋白(AU-binding protein，AUBP)能調(diào)節(jié)mRNA去腺苷酸，改變mRNA降解的速率，磷酸化AUBPs可以穩(wěn)定mRNA。NFAR1是一個與IL-2mRNAARE區(qū)結(jié)合的AUBP，在過量表達時可以穩(wěn)定IL-2 mRNA。NFAR1基因編碼區(qū)含

2、有一個保守的AKT底物序列，其中S647位是AKT保守的磷酸化位點。在本文中證實了AKT與NFAR1相互作用的，并共定位于細胞核，并用體外實驗和體內(nèi)實驗證明了AKT確實可以磷酸化NFARl的S647位。 為了進一步說明AKT磷酸化NFAR1的生理意義，我們檢測了外源表達NFAR1野生型，失磷酸化突變型NFAR1-S647A及模擬S647被磷酸化的假磷酸化突變型NFAR1-S647E對IL-2 mRNA半衰期的影響。其中野生型可以

3、穩(wěn)定IL-2mRNA，NFAR1-S647A則和空載體CMV-Myc類似，穩(wěn)定IL-2 mRNA能力很低；而轉(zhuǎn)染NFAR1-S647E的細胞中IL-2 mRNA穩(wěn)定性與野生型近似，略高于野生型。我們還觀察到AKT和野生型NFAR1共轉(zhuǎn)的Jurkat細胞中IL-2mRNA穩(wěn)定性要遠遠高于AKT和NFARIS647A共轉(zhuǎn)的細胞，也高于單轉(zhuǎn)NFAR1的細胞；PI3-K通路的抑制劑LY290042抑制NFAR1野生型穩(wěn)定IL-2 mRNA的功能

4、，NFAR1-S647A則對LY290042不敏感。通過上述實驗證明了AKT通過磷酸化NFAR1 S647調(diào)節(jié)IL-2mRNA的穩(wěn)定性。 我們進一步檢測CD28刺激信號對NFARl磷酸化程度的影響以及NFAR1 S647位的磷酸化對CD28所介導(dǎo)的IL-2轉(zhuǎn)錄后調(diào)控所起的作用。發(fā)現(xiàn)CD28刺激后，NFARI的磷酸化水平明顯增加，而且這種增加是伴隨著AKT磷酸化水平增加的；一旦AKT被抑制，S647位的磷酸化水平也隨之下降。放射免

5、疫方法檢測到NFARI野生型和NFAR1-S647A對CD28所誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控有明顯的不同。NFAR1可以穩(wěn)定IL-2 mRNA并提高蛋白表達量，突變型則沒有這樣的作用，這說明NFAR1S647位的磷酸化對CD28穩(wěn)定IL-2 mRNA非常重要。 根據(jù)上述的研究結(jié)果，我們提出了一條CD28穩(wěn)定IL-2 mRNA可能的分子通路：CD28刺激激活A(yù)KT，活化的AKT進入細胞核內(nèi)磷酸化NFAR1 S647位，促使IL-2 mRNA穩(wěn)