氯化鋇阻滯內(nèi)向整流鉀通道所致大鼠冠狀動脈收縮的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　1.通過觀察內(nèi)向整流鉀通道（inward rectifier potassium channels, Kir）阻滯劑氯化鋇（BaCl2,0.1-1.0 mmol/L）對離體大鼠冠狀動脈（Rat coronary artery, RCA）靜息張力的影響，研究Kir阻滯對RCA的收縮作用。
　　2.采用去鈣-復(fù)鈣的方法，研究BaCl2收縮RCA對細(xì)胞內(nèi)鈣（[Ca2+]i）釋放和細(xì)胞外鈣（[Ca2+]o）內(nèi)流的依賴性。

2、
　　3.通過觀察氯通道阻滯劑NPPB和尼氟滅酸（NFA），鈣通道阻滯劑硝苯地平對BaCl2收縮RCA作用的影響，從氯通道和鈣通道角度探討其收縮機(jī)制；通過抑制劑（環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛、MAPK抑制劑PD98059和SB239063）實(shí)驗，探討B(tài)aCl2收縮RCA與前列腺素合成及MAPK通路之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.正常成年雄性Sprague-Dawley大鼠，200-250 g，腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg

3、/kg）麻醉，斷頭，放血處死，迅速取出心臟，置于4℃預(yù)冷生理鹽溶液（physiological salt solution, PSS）中。在解剖顯微鏡下沿右心室打開心腔，鈍性分離冠狀動脈（直徑150~260μm）。將血管剪成長度約為2 mm的血管環(huán)，使用兩根直徑為40μm的鋼絲固定于Multi Myograph System-610M微血管張力記錄儀（DMT）浴槽（盛有5mL PSS，37℃）中。采用PowerLab張力記錄系統(tǒng)觀察RC

4、A血管張力變化。血管環(huán)標(biāo)準(zhǔn)化并平衡1 h后，采用KCl（60 mmol/L）刺激血管環(huán)三次，待血管環(huán)對KCl（60 mmol/L）的收縮可重復(fù)后開始正式實(shí)驗。靜息狀態(tài)時，向浴槽中累積加入BaCl2（0.1,0.3,1.0 mmol/L），記錄血管張力變化，結(jié)果以KCl（60 mmol/L）引起的最大收縮幅度為100％，計算BaCl2各濃度所致收縮幅度的百分比，并構(gòu)建BaCl2濃度-效應(yīng)曲線。
　　2.采用去鈣-復(fù)鈣的方法，觀察細(xì)胞

5、外鈣（[Ca2+]o）內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣（[Ca2+]i）釋放在BaCl2收縮RCA中的作用。當(dāng)RCA對BaCl2（0.3 mmol/L）的收縮幅度可重復(fù)時，先用含有EGTA（1.0 mmol/L）的無鈣PSS液洗脫血管環(huán)三次，再用不含有EGTA的無鈣PSS液洗脫三次，穩(wěn)定20 min后，向浴槽內(nèi)加入BaCl2使其在浴槽內(nèi)的終濃度為0.3 mmol/L，觀察RCA血管張力的變化。10 min后，向浴槽中加入CaCl2（2.5 mmol/L）

6、，觀察復(fù)鈣后RCA血管張力的變化。計算復(fù)鈣前后BaCl2所致收縮占總收縮的百分比，以此反映BaCl2引起的RCA收縮對細(xì)胞內(nèi)外鈣的依賴性，以KCl（60 mmol/L）為比較對照。
　　3.待RCA對BaCl2（0.1-1.0 mmol/L）反應(yīng)可重復(fù)后，分別觀察以下抑制劑對BaCl2收縮RCA的影響:L-型電壓依賴性鈣通道阻滯劑硝苯地平（0.3μmol/L）、ERK1/2抑制劑PD98059（3μmol/L）、p38MAPK抑制

7、劑SB239063（3μmol/L）、環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛（10,30,100μmol/L）、氯通道阻滯劑NFA（10,30,100μmol/L）和NPPB（10,30,100μmol/L）。用不同濃度抑制劑分別預(yù)孵30 min后，在抑制劑持續(xù)存在的情況下，用同濃度的BaCl2刺激RCA。結(jié)果以KCl（60 mmol/L）引起的收縮幅度為100%，分別計算預(yù)孵不同濃度抑制劑前后BaCl2的收縮幅度。
　　結(jié)果：
　　1.靜

8、息狀態(tài)下，BaCl2（0.1-1.0 mmol/L）濃度依賴性地引起RCA收縮。BaCl2（0.1,0.3,1.0 mmol/L）的收縮幅度分別為（0.42±0.12）mN、（2.63±0.51）mN、（5.68±1.62） mN，分別相當(dāng)于KCl（60 mmol/L）收縮幅度的（7.64±2.13）%、（49.32±6.46）%、（104.56±10.15）%。其EC50值為0.34mmol/L。
　　2. BaCl2（0.3

9、mmol/L）在正常PSS液中的收縮幅度為（2.83±0.98）mN，相當(dāng)于KCl（60 mmol/L）收縮幅度的（49.92±5.83）%。在無鈣液中和復(fù)鈣后的幅度分別占BaCl2總收縮幅度的（31.63±5.23）%、（68.37±5.94）%。KCl（60 mmol/L）在正常PSS液中的收縮幅度為（5.78±1.21）mN，在無鈣液中和復(fù)鈣后的收縮百分比分別為KCl總收縮的（5.58±1.63）%、（94.42±11.27）%。

10、
　　3.硝苯地平（0.3μmol/L）對BaCl2最大收縮的抑制率為（87.82±5.43）%（P<0.01）。NFA（10,30,100μmol/L）、NPPB（10,30,100μmol/L）濃度依賴性地使BaCl2濃度-效應(yīng)曲線右移，并抑制最大反應(yīng)。NFA（30,100μmol/L）對BaCl2最大收縮的抑制率分別為（28.29±5.37）%（P<0.05）、（82.24±7.69）%（P<0.01），IC50為56.34

11、μmol/L。NPPB（30,100μmol/L）使BaCl2對RCA的最大收縮幅度分別減小了（40.45±6.91）%（P<0.05），（90.83±10.42）%（P<0.01），IC50為37.81μmol/L。
　　4.吲哚美辛（10,30,100μmol/L）濃度依賴性地使BaCl2濃度-效應(yīng)曲線右移，并使其最大效應(yīng)降低。Indo（100μmol/L）對BaCl2最大收縮的抑制率為（73.23±5.47）%（P<0.01

12、），IC50為93.42μmol/L。
　　5.預(yù)孵PD98059（3μmol/L）對BaCl2最大收縮的抑制率為（40.62±5.29）%（P<0.05）；預(yù)孵SB239063（3μmol/L）對BaCl2最大收縮的抑制率為（54.95±8.32）%（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.靜息狀態(tài)下，BaCl2（0.1-1.0 mmol/L）濃度依賴性地收縮離體RCA。
　　2. BaCl2收縮RCA所需要的C