基于代謝組學(xué)技術(shù)的妊娠期糖尿病中醫(yī)證候的研究.pdf

1、目的:
　　本研究通過(guò)調(diào)查妊娠期糖尿病患者的中醫(yī)證候，總結(jié)妊娠期糖尿病中醫(yī)證型分布規(guī)律;同時(shí)利用代謝組學(xué)技術(shù)，尋找妊娠期糖尿病心陰虛證、氣陰兩虛證、未定證型血液標(biāo)本的代謝標(biāo)志物，分析其代謝途徑，以期探索妊娠期糖尿病不同中醫(yī)證型的病理特點(diǎn)，為妊娠期糖尿病的證型客觀化、中醫(yī)藥治療提供客觀理論依據(jù)，并為進(jìn)一步的妊娠期糖尿病中醫(yī)治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.選取2013年3月～2016年12月在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院

2、產(chǎn)科規(guī)范產(chǎn)檢、分娩且資料完整的GDM孕婦430例作為GDM中醫(yī)證型研究部分的研究對(duì)象。根據(jù)中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中醫(yī)診斷學(xué)分會(huì)修正的《中醫(yī)常見(jiàn)證診斷標(biāo)準(zhǔn)》及妊娠期糖尿病癥狀特點(diǎn)制定妊娠期糖尿病《中醫(yī)證候調(diào)查表》，并采用此調(diào)查表對(duì)患者中醫(yī)證候群進(jìn)行調(diào)查，總結(jié)妊娠期糖尿病的常見(jiàn)中醫(yī)證型。
　　2.選取其中GDM孕婦共60例做為代謝組學(xué)研究部分的研究對(duì)象，首先按確診時(shí)的孕周分組，分為觀察1組(孕24-28周)，共29例，觀察2組(孕28-32周

3、)，共31例;再按GDM中醫(yī)證型分組，分為心陰虛組，共20例，氣陰兩虛組，共23例，未定證型組，共17例。同期選取OGTT試驗(yàn)正常的孕婦19名作為正常對(duì)照組。
　　3.收集研究對(duì)象的一般情況項(xiàng)目(包括年齡、孕周、孕次、產(chǎn)次、身高、收縮壓(SBP，mmHg)、舒張壓(DBP，mmHg)、孕前體重，并計(jì)算體重指數(shù)(BMI=體重(Kg)/[身高(m)]2))。抽血檢查，觀察各研究對(duì)象的血糖[空腹(FBG)、餐后1h(1hPBG)、餐后2

4、h(2hPBG)]、糖化血紅蛋白(HbAlc)、胰島素[空腹(FINS)、餐后2h(2hPINS)]、血脂[(甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)]、甲狀腺功能[促甲狀腺激素(TSH)、游離甲狀腺激素(FT4)、甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPOab)]、血紅蛋白等相關(guān)臨床指標(biāo)。
　　4.抽取代謝組學(xué)研究對(duì)象的空腹血液，采用UPLC-Q-TOF/MS進(jìn)行代謝組學(xué)檢測(cè)，

5、使用Masslynx V4.1工作站采集譜圖數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)導(dǎo)入Progenesis QI2.0、EZinfo軟件分析，分別采用PCA、PLS-DA、OPLS-DA等不同模式識(shí)別方法進(jìn)行分析，通過(guò)人類代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)HMDB(Human Metabolome Database)、Mass Bank、化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)NIST和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)，確定差異生物標(biāo)志物，分析其代謝途徑。
　　結(jié)果:
　　1.GDM出現(xiàn)頻率較高的前十位中醫(yī)證素是:失眠(

6、85.0％)、健忘(83.8％)、尿頻(81.2％)、頭暈(79.3％)、腰酸(78.8％)、自汗(71.3％)、水腫(58.5％)、舌淡有齒痕(55.4％)、倦怠無(wú)力(51.6％)、脈細(xì)數(shù)(50.9％)。常見(jiàn)中醫(yī)證型有:心陰虛證、氣陰兩虛證、脾腎陽(yáng)虛、脾虛濕困、腎陰虛。還有一部分病例因評(píng)分不足14分，歸為未定證型類。
　　2.一般資料結(jié)果:GDM與正常對(duì)照組、GDM不同孕周組以及GDM三組不同中醫(yī)證型間的年齡、孕周、孕次、產(chǎn)次、

7、身高、BMI的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.臨床指標(biāo)結(jié)果:
　　與正常對(duì)照組相比，GDM組的FBG、1hPBG、2hPBG升高，AST降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　在GDM不同孕周組中，與觀察1組(24-28周)比較，觀察2組(28-32周)中HbAlc和TG升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而FBG、1hPBG、2hPBG、FINS、2hPINS、HOMA-IR、ISI、HOMA-

8、β、HGB、TSH、FT4、TPOab、CHOL、HDL-C、LDL-C差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　在GDM心陰虛組、氣陰兩虛組、未定證型組三組間，F(xiàn)BG、1hPBG、2hPBG、HbAlc、FINS、2hPINS、HOMA-IR、ISI、HOMA-β的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PP＞0.05);HGB、TSH、FT4、TPOab、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，

9、r>　　4.代謝組學(xué)模式識(shí)別方法結(jié)果:經(jīng)過(guò)PLS-DA及OPLS-DA分析，GDM心陰虛組、氣陰兩虛組、未定證型組及正常對(duì)照組之間能夠完全分離。各組的各個(gè)積分值主要分布于橢圓形散點(diǎn)圖(95％置信區(qū)內(nèi))的區(qū)域，無(wú)明顯的交叉和重疊。
　　5.經(jīng)過(guò)篩選，共發(fā)現(xiàn)有25種化合物與GDM的不同孕周及各中醫(yī)證型的代謝有關(guān)。
　　與GDM觀察1組(24-28周)相比，GDM觀察2組(28-32周)11種代謝物質(zhì)均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其中有8種代謝

10、物存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示明顯增加，說(shuō)明GDM不同孕周的人群中血液代謝物譜發(fā)生了變化。
　　與正常對(duì)照組比較，心陰虛組14種代謝物質(zhì)均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其中共有12種代謝物存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示明顯增加;氣陰兩虛組則有12種代謝物質(zhì)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，有2種代謝物明顯減少，但只有6種代謝物存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示明顯增加;未定證型組有13種代謝物增加，1種代謝物下降，12種代謝物存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這結(jié)果顯

11、示:與正常對(duì)照組比較，GDM心陰虛證、氣陰兩虛證、未定證型這三種證候人群體內(nèi)有多個(gè)代謝物差異變化，尤其是心陰虛組證候人群較為明顯。
　　GDM心陰虛、氣陰兩虛組、未定證型組間比較，13種代謝物質(zhì)均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，其中共有12種代謝物存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示明顯增加。此結(jié)果顯示:GDM心陰虛證、氣陰兩虛證、未定證型三種不同證型人群的體內(nèi)代謝物也有差異變化。
　　6.在兩種不同類型的分組中，發(fā)現(xiàn)分子質(zhì)量分別為782.5

12、688、758.5691、730.5892、544.3442四種代謝物均存在差異。進(jìn)行鑒定識(shí)別后，差異代謝物分別為:PC(36∶4)，磷脂酰膽堿;PC(34.2)，磷脂酰膽堿;PE(20∶1)，磷脂酰乙醇胺;LPC(22∶4)，溶血磷脂酰膽堿。
　　結(jié)論:
　　1.妊娠期糖尿病中醫(yī)病性多為虛證，以陰虛為主，兼有氣虛和濕郁，病位在心、脾、腎，中醫(yī)證型主要以心陰虛和氣陰兩虛為主。另外，在我們的前期研究中還發(fā)現(xiàn)，脾虛濕困GDM孕婦

13、平均年齡明顯高于其它常見(jiàn)中醫(yī)證型，而脾虛濕困證患者胰島素抵抗程度同時(shí)也比其它各中醫(yī)證型GDM患者嚴(yán)重，因此，在臨床中，可以考慮對(duì)年齡偏大的患者通過(guò)健脾滲濕的方法，幫助改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。
　　2.妊娠期糖尿病三種不同中醫(yī)證型之間，無(wú)論在一般情況、肝功能、甲狀腺功能等方面的差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在血糖和血脂代謝方面也未見(jiàn)明顯的差異，說(shuō)明運(yùn)用臨床中常用的生化及免疫學(xué)指標(biāo)，無(wú)法很好的將GDM不同中醫(yī)證型區(qū)分開(kāi)來(lái)，需要在其它領(lǐng)域進(jìn)一步探索

14、有差異的物質(zhì)。
　　3.妊娠期糖尿病人群的血液代謝物譜發(fā)生變化，提示其具有代謝物質(zhì)基礎(chǔ)。GDM不同孕周之間、不同中醫(yī)證型之間均存在代謝差異，主要涉及的具體代謝物有所差異。
　　4.磷脂酰膽堿[PC(36∶4)、PC(34∶2)]、溶血性磷脂酰膽堿[LPC(22∶4)]、磷脂酰乙醇胺[PE(20∶1)]等濃度變化可以考慮為GDM及其不同中醫(yī)證型間潛在的代謝標(biāo)志物，這些物質(zhì)可能成為GDM不同中醫(yī)證型間的紐帶，并做為GDM早期篩查