JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在妊娠期糖尿病中作用的研究.pdf

1、妊娠期糖尿?。╣estationaldiabetesmellitus，GDM）是一種在妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度糖代謝異常的內(nèi)分泌代謝性疾病。近幾年來(lái)GDM的發(fā)病率在全球均表現(xiàn)出逐年上升趨勢(shì)。該疾病嚴(yán)重危害母親及胎兒的健康，甚至危及圍產(chǎn)兒的生命。
　　氧化應(yīng)激（oxidativestress，OS）是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）和活性氮自由基（reactivenit

2、rogenspecies，RNS）產(chǎn)生過(guò)多或發(fā)生代謝障礙，造成組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上的損壞。
　　研究表明，氧化應(yīng)激可能通過(guò)激活c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-teminalKinase，JNK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)JNK在胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、β細(xì)胞功能障礙、胰島素抵抗（Insulinresistance，IR）以及多種應(yīng)激反應(yīng)引起的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用。然而氧化應(yīng)激和JNK的活

3、化及其下游凋亡誘導(dǎo)因子Bax與GDM發(fā)病及流產(chǎn)、早產(chǎn)、胚胎畸形等并發(fā)癥的相關(guān)性報(bào)道較少。
　　本研究通過(guò)構(gòu)建GDM孕鼠模型做為研究對(duì)象，檢測(cè)孕鼠子宮和胎盤組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛含量（MDA）、超氧化物歧化酶活性（SOD）以及總抗氧化能力（T-AOC），并測(cè)定p-JNK以及凋亡誘導(dǎo)因子Bax蛋白在子宮和胎盤組織的表達(dá)情況，通過(guò)特異性抑制JNK活性，探討JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在GDM及其相關(guān)并發(fā)癥中的作用，從而更好地為臨床預(yù)防、診斷和治

4、療GDM提供理論依據(jù)和研究方向。
　　本實(shí)驗(yàn)分為三部分：
　　第一部分：妊娠期糖尿病大鼠模型的構(gòu)建
　　目的：探討鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立GDM孕鼠模型中不同給藥劑量對(duì)該模型穩(wěn)定性的影響，為研究GDM對(duì)母體和胎兒影響提供較好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：將獲得的46只Sprague-Dawley孕鼠隨機(jī)分為4組，分別一次性腹腔注射STZ35mg/kg，45mg/kg，60mg/kg和等量的檸檬酸鹽緩沖

5、液。于妊娠第3，9，14，19d測(cè)空腹血糖，并觀察成模孕鼠在妊娠周期中體質(zhì)量、食量、飲水量及尿量的變化，比較孕鼠成模率、轉(zhuǎn)陰率和死亡率。孕鼠在妊娠第19d解剖，取其胰腺組織經(jīng)常規(guī)HE染色后，光鏡下觀察病理分析。結(jié)果：STZ45mg/kg組孕鼠在用藥3d后出現(xiàn)明顯的“三多一少”癥狀，其成模率最高（83.3％），轉(zhuǎn)陰率最低。STZ45mg/kg組與對(duì)照組空腹血糖值（mmol/L,21.8±3.0νs5.9±1.2）比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0

6、.05），體質(zhì)量也明顯減少，其高血糖狀態(tài)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)且最穩(wěn)定。結(jié)論：STZ45mg/kg腹腔注射給藥是建立GDM孕鼠模型的最佳劑量，具有較好的穩(wěn)定性。
　　第二部分：氧化應(yīng)激和p-JNK蛋白在GDM孕鼠子宮和胎盤組織中的表達(dá)及其與IR相關(guān)性的研究
　　目的：觀察氧化應(yīng)激和磷酸化c-jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白在妊娠期糖尿病孕鼠子宮和胎盤組織中的變化，探討其在GDM發(fā)病中的作用。方法：應(yīng)用比色法檢測(cè)妊娠期糖尿病大鼠（G

7、DM組，n=10只）和正常妊娠大鼠（正常妊娠組，n=10只）子宮和胎盤組織勻漿中丙二醛（MDA）水平、超氧化物岐化酶（SOD）含量以及總抗氧化能力（T-AOC）。采用免疫組化和westernblotting法檢測(cè)GDM組、JNK抑制劑SP600125（SP組）和正常妊娠組孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白的表達(dá)水平。同時(shí)檢測(cè)各組孕鼠空腹血糖水平（FPG）、空腹胰島素水平（FINS）和胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。結(jié)果：(1)GDM組

8、孕鼠FPG、FINS及HOMA-IR水平均明顯高于正常妊娠組（P<0.05）。GDM組孕鼠子宮和胎盤組織內(nèi)MDA水平顯著高于正常妊娠組（P<0.05），而SOD含量和T-AOC則明顯低于正常妊娠組（P<0.05）。(2)p-JNK主要在子宮腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞和少量平滑肌細(xì)胞的胞漿和胞核中表達(dá)以及胎盤絨毛膜層及母胎界面蛻膜細(xì)胞的胞漿和(或)胞核中表達(dá)。GDM組子宮和胎盤組織中p-JNK的表達(dá)水平明顯高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

9、05）。JNK抑制劑SP600125干預(yù)后GDM孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK表達(dá)顯著減少（P<0.05）。(3)GDM組孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白表達(dá)水平與MDA含量呈正相關(guān)（P<0.05）；與SOD含量以及T-AOC均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）；而正常妊娠組則均無(wú)相關(guān)性。(4)GDM組HOMA-IR與子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)（P<0.05）；而SP組及正常妊娠組則均無(wú)相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論：GDM孕

10、鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激程度與JNK蛋白的活化密切相關(guān)，而激活的JNK可能加劇了GDM胰島素抵抗，p-JNK表達(dá)異?？赡芘cGDM發(fā)病中有著重要的關(guān)系。
　　第三部分：GDM孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK導(dǎo)致細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究
　　目的：觀察凋亡誘導(dǎo)因子Bax在妊娠期糖尿病孕鼠子宮和胎盤組織中的變化。方法：采用免疫組化和westernblotting法檢測(cè)GDM組、JNK抑制劑SP600125（SP組）和正常妊娠組孕鼠子宮和胎盤組織中B