ERCC1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的:
　　隨著人們生活習(xí)性的改變及現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的提高，腎癌的檢出率逐年上升，如今已經(jīng)成為常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。腎透明細(xì)胞癌(RCCC)是腎癌最為常見(jiàn)的病理類(lèi)型[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)只有早期的RCCC(T1～2期)可以通過(guò)手術(shù)治療，并且遠(yuǎn)期預(yù)后良好[3-5]，而晚期的RCCC(T3～4期)對(duì)藥物及手術(shù)的療效均較差，平均壽命僅有40個(gè)月，其5年的生存率在10％以下。因此研究出新的特異性高的腫瘤標(biāo)記物，提高腎透明細(xì)胞癌初期的

2、診斷率，改善疾病預(yù)后，延長(zhǎng)患者壽命，是我們科研工作者一直以來(lái)的奮斗目標(biāo)。
　　核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)是核苷酸外切除修復(fù)家族中重要成員之一，是一種相對(duì)高度保守的單鏈DNA核酸內(nèi)切酶，在DNA損傷修復(fù)和死亡過(guò)程當(dāng)中發(fā)揮著緊要的作用，在人類(lèi)染色體的19q13.2區(qū)域，相對(duì)分子量為15kD(1D=1U)。有研究表明，細(xì)胞之所以癌變，主要是因?yàn)镈NA的損傷不能及時(shí)得到修復(fù)，最終導(dǎo)致染色體發(fā)生突變，細(xì)胞癌變。而Vineis

3、等[6]研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因是通過(guò)識(shí)別及修復(fù)損傷的DNA，保證基因完整性的方式參與癌癥的發(fā)生發(fā)展的，因此ERCC1作為修復(fù)損傷的一個(gè)關(guān)鍵基因受到人們的廣泛關(guān)注，現(xiàn)階段尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于ERCC1在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)的研究。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量分析，研究ERCC1在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株及正常腎組織中的表達(dá)情況，探究其在癌癥發(fā)生及發(fā)展中所產(chǎn)生的作用。
　　方法:
　　選取2013年11月

4、到2014年5月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科就診的50例腎透明細(xì)胞癌患者做為研究對(duì)象。其中男性占28例，女性占22例，年齡35～78歲，平均(54.40±9.56)歲。所有RCCC患者在手術(shù)治療前均沒(méi)有接受放、化療等干預(yù)措施。50例腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本做為病例組。再?gòu)脑?0例患者中隨機(jī)挑選20例，取距RCCC大于3cm的癌旁腎臟組織標(biāo)本，做為正常對(duì)照組。將所有待測(cè)樣品均分為兩份，一份在4％的甲醛溶液中固定，然后用石蠟包被，最后切成厚度

5、大約為4μm的薄片待測(cè)。另一份置于液氮儲(chǔ)存?zhèn)溆?。按Fuhrman三級(jí)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)劃分RCCC的分化程度。
　　免疫組織化學(xué)方法檢測(cè):應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)，從蛋白水平對(duì)石蠟包埋的組織中的ERCC1進(jìn)行檢測(cè)，其中腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本50例，正常腎組織標(biāo)本20例。在光鏡下應(yīng)用陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比例和表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行綜合的評(píng)分。用x2檢驗(yàn)比較RCCC組和對(duì)照組中ERCC1的陽(yáng)性表達(dá)率之間的差異。分析ERCC1與RCCC病理分級(jí)、患者年齡和性別的關(guān)系。

6、
　　反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)方法檢測(cè):嚴(yán)格按照cDNA試劑盒的使用說(shuō)明方法提取組織中的RNA，加入RT反應(yīng)體系的管中，設(shè)置GAPDH基因片段為ERCC1基因表達(dá)的內(nèi)參照基因，在94℃恒溫變性3min的條件下進(jìn)行PCR的擴(kuò)增引物，取標(biāo)本擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠為1％的含GV核酸染料，并以DNAMarker(DL2000)為其準(zhǔn)則的片段標(biāo)識(shí)，電泳后利用紫外透射儀觀察，結(jié)果以二者之積分吸光度的比值表示。兩組間的吸光度

7、比值采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。
　　用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。把P＜0.05定為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學(xué)染色示:ERCC1在RCCC和正常對(duì)照組的腎組織中均有所表達(dá)，ERCC1在RCCC組中的陽(yáng)性表達(dá)率為60％高于ERCC1在正常對(duì)照組中的陽(yáng)性表達(dá)率25％(x2=7.000，P=0.008);ERCC1的表達(dá)在病理高分化組和中分化組大于低分化組(x2=8.680，P

8、=0.002)。ERCC1的表達(dá)與年齡無(wú)關(guān)(x2=1.330，P=0.227)。ERCC1蛋白的表達(dá)與性別無(wú)關(guān)(x2=1.640,P=0.187)。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:ERCC1在腎透明細(xì)胞癌的表達(dá)量為0.280±0.030，而在癌旁正常組織的表達(dá)量為0.104±0.011，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=36.185，P=0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、ERCC1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常組織中的表