維生素 K2預(yù)防激素型股骨頭壞死的實驗研究.pdf

1、目的：體外觀察激素及激素聯(lián)合應(yīng)用維生素 K2對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、成骨細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)的影響，體內(nèi)觀察維生素 K2對大鼠激素型股骨頭壞死模型的預(yù)防作用.
　　方法：第一部分：提取SD大鼠BMSC，分別用5*10-5M MP及MP聯(lián)合梯度濃度的VK2（10-7M-10-5M）進(jìn)行干預(yù)，檢測BMSC增值能力，細(xì)胞活性及成骨誘導(dǎo)3周后成骨相關(guān)蛋白Runx2、ALP、OCN的表達(dá)水平及BMSC礦化水平。第二部分：MC3T3-E1細(xì)胞

2、分別用10-5M DEX及 DEX聯(lián)合梯度濃度的VK2（10-7M-10-5M）進(jìn)行干預(yù)，檢測 MC3T3-E1的增值能力，細(xì)胞凋亡，及成骨相關(guān)蛋白 Runx2、ALP、OCN的表達(dá)及礦化能力。第三部分： EAhy926、MG63分別用10-5M DEX、10-6M VK2及DEX聯(lián)合10-6M VK2進(jìn)行干預(yù)，檢測EAhy926的增值能力，細(xì)胞凋亡，體外成管，遷移能力及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。第四部分：甲強(qiáng)龍注

3、射建立SD大鼠激素型股骨頭壞死模型，預(yù)防性應(yīng)用VK2干預(yù)，檢測各組血清OCN分泌水平、股骨頭壞死發(fā)生率、股骨頭標(biāo)本Runx2、OCN蛋白表達(dá)水平及股骨頭血運(yùn)情況，評價VK2對激素型股骨頭壞死的預(yù)防作用。第五部分：梯度濃度VK2(10-7M-10-5M)干預(yù)hBMSC，檢測成骨誘導(dǎo)1周后miR-133a及成骨相關(guān)蛋白表達(dá)水平；建立miR-133a過表達(dá)hBMSC細(xì)胞株，成骨誘導(dǎo)條件下梯度濃度VK2干預(yù)，檢測miR-133a及成骨蛋白表達(dá)。

4、
　　結(jié)果：第一部分：MP明顯抑制了BMSC的增值能力，細(xì)胞活性及成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)，而VK2促進(jìn)了激素干預(yù)的BMSC的細(xì)胞增值，增強(qiáng)了其活性，同時促進(jìn)了激素干預(yù)的BMSC成骨分化能力。第二部分：DEX明顯抑制了MC3T3-E1細(xì)胞增值，促進(jìn)細(xì)胞凋亡并抑制了MC3T3-E1的成骨分化，而聯(lián)合應(yīng)用VK2促進(jìn)了MC3T3-E1細(xì)胞增值及成骨分化能力，抑制了細(xì)胞凋亡。第三部分：DEX、VK2對EAhy926細(xì)胞增值無明顯影響，DEX抑制

5、了EAhy926細(xì)胞的成管及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達(dá)，VK2促進(jìn)了DEX干預(yù)的EAhy926細(xì)胞的成管及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達(dá)。第四部分：VK2提高了激素干預(yù)大鼠血清羧化和非羧化 OCN水平，促進(jìn)了OCN的羧化，降低了激素干預(yù)大鼠股骨頭壞死的發(fā)生率，同時提高股骨頭骨小梁結(jié)構(gòu)及相關(guān)蛋白的表達(dá)，保護(hù)股骨頭血供。第五部分：miR-133a過表達(dá)明顯抑制了 hBMSC成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)，而VK2同時降低了h