活血通督湯對(duì)坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型大鼠脊髓的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)觀察活血通督湯對(duì)坐骨神經(jīng)鉗夾傷大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的形態(tài)變化和相應(yīng)節(jié)段脊髓組織iNOS、NGF、GDNF的表達(dá)情況，探討HXTDD保護(hù)脊髓神經(jīng)元的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　1、建立大鼠坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型2月齡SD大鼠16只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(8只)和模型組（8只）。模型組:大鼠麻醉后制成坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型;假手術(shù)組只暴露坐骨神經(jīng)，但不致傷神經(jīng)。兩組術(shù)后常規(guī)飼料喂養(yǎng)4w后取材，分別通過(guò)HE染色、尼氏染色

2、，觀察光鏡下相應(yīng)節(jié)段脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的形態(tài)變化和計(jì)數(shù)其神經(jīng)元存活率，并以免疫組化分析iNOS蛋白表達(dá)情況，鑒定造模是否成功。
　　2、活血通督湯對(duì)坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型大鼠脊髓的作用觀察2月齡SD大鼠48只，隨機(jī)分為假手術(shù)組16只，模型組16只，活血通督湯組16只。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)造模操作，模型組和活血通督湯組建立大鼠坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型，假手術(shù)組只暴露坐骨神經(jīng)，但不致傷神經(jīng)。各組術(shù)后待動(dòng)物蘇醒后立即開(kāi)始給藥干預(yù)，活血通督湯組灌服活血通督

3、湯，假手術(shù)組、模型組灌服等劑量0.9％氯化鈉溶液，每日2次，連續(xù)服用4w。給藥后每周記錄大鼠行為學(xué)變化情況。術(shù)后4周取材，相應(yīng)節(jié)段脊髓組織行HE、尼氏染色法;免疫組化法檢測(cè)脊髓組織iNOS表達(dá)量;以WB、qPCR檢測(cè)各組大鼠脊髓iNOS、NGF、GDNF的蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、建立大鼠坐骨神經(jīng)鉗夾傷模型。
　　2、大鼠行為學(xué)變化:術(shù)后每周進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定，活血通督湯組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能恢復(fù)快于模型組，

4、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。
　　3、大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓組織HE染色:假手術(shù)組:脊髓神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞輪廓清晰，大而多角，核呈藍(lán)紫色，基質(zhì)著色均勻，有極性存在。模型組:脊髓神經(jīng)元結(jié)構(gòu)不清，形態(tài)多樣，基質(zhì)染色不均，細(xì)胞核縮小或不清，細(xì)胞周圍空泡形成明顯。活血通督湯組:其神經(jīng)細(xì)胞外貌較模型組規(guī)整，有散在的尼氏體，核仁較清楚，空泡樣改變極少，部分神經(jīng)元有水腫。
　　4、大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活率變化

5、:術(shù)后4w，與假手術(shù)組相比，其余兩組的脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活率顯著下降（P＜0.01），但活血通督湯組存活的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元較模型組多。
　　5、大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓組織iNOS免疫組化法分析:模型組iNOS表達(dá)最高，且活血通督湯組明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）。
　　6、大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓組織iNOS、NGF、GDNF的蛋白表達(dá):藥物治療4周后，活血通督湯組GDNF、NGF的的蛋白表達(dá)水平較模型組明顯上升，iNOS表達(dá)較模型組有所下

6、降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。
　　7、大鼠相應(yīng)節(jié)段脊髓組織iNOS、NGF、GDNFmRNA的表達(dá):在受損脊髓組織中，iNOSmRNA的表達(dá)有所增強(qiáng)，模型組明顯高于活血通督湯組跟假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;脊髓組織GDNFmRNA和NGFmRNA表達(dá)，活血通督湯組、模型組均較假手術(shù)組高，而活血通督湯組也高于模型組表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、活血通督湯能改善坐骨神經(jīng)