一氧化氮干預(yù)促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：
　　胰腺癌是一種病死率極高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。侵襲轉(zhuǎn)移是胰腺癌的常見現(xiàn)象與局部復(fù)發(fā)和疼痛有著重要聯(lián)系。一氧化氮（NO）可調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的生長及侵襲等生物學(xué)行為，在維持胰腺癌的惡性生物學(xué)行為起到重要作用。NO可上調(diào)癌細(xì)胞自噬水平為侵襲轉(zhuǎn)移供應(yīng)能量。神經(jīng)浸潤（PNI）是胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的主要方式，也是胰腺癌轉(zhuǎn)移的特殊通道。
　　研究目的：
　?。?）觀察NO相關(guān)蛋白在胰腺癌中的表達(dá)及其臨床意義，探討NO相關(guān)蛋白

2、與胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移尤其是神經(jīng)浸潤（PNI）的相關(guān)性；
　?。?）觀察NO供體對胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響及其可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　?。?）免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測E-cadherin、iNOS、NQO1及LC-3在胰腺癌組織中的表達(dá)，分析其與胰腺癌臨床病理特征及PNI之間的相關(guān)性。
　?。?）通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測DETA/NO對胰腺癌細(xì)胞株遷移及侵襲能力的影響。
　

3、　（4）應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)檢測DETA/NO干預(yù)胰腺癌細(xì)胞株后其侵襲相關(guān)蛋白mRNA水平的變化。
　?。?）Western blot檢測DETA/NO對胰腺癌細(xì)胞株自噬相關(guān)蛋白表達(dá)變化的影響。
　　結(jié)果：
　　（1）E-cadherin、iNOS、NQO1、及LC-3在胰腺癌組織中表達(dá)率分別是68.9％、63.9%、55.7%、57.4%，E-cadherin表達(dá)與LC-3具有相關(guān)性，LC-3與胰腺癌局

4、部浸潤發(fā)生具有相關(guān)性，E-cadherin、LC-3表達(dá)與胰腺癌神經(jīng)浸潤具有顯著相關(guān)性。
　?。?）不同濃度DETA/NO對胰腺癌細(xì)胞株增殖影響有差異，低濃度促進(jìn)癌細(xì)胞增殖水平，高濃度抑制增殖。
　?。?）低濃度DETA/NO對胰腺癌細(xì)胞株進(jìn)行干預(yù)，可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞株遷移及侵襲能力。
　　（4）50μM濃度的DETA/NO干預(yù)BxPc-3細(xì)胞株可上調(diào)相關(guān)基因iNOS、TNF、MMP-2、MMP-9的mRNA水平，其中M

5、MP-2的mRNA水平顯著增高；
　?。?）用100 uM的DETA/NO干預(yù)1h后，LC-3表達(dá)水平即開始升高，而隨干預(yù)時(shí)間延長至8小時(shí)即又降至接近正常，而NQO1和Beclin1無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　NO代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)與胰腺癌惡性生物學(xué)特性密切相關(guān)，在胰腺癌進(jìn)展中可能扮演重要角色。低濃度NO促使胰腺癌細(xì)胞遷移侵襲能力增強(qiáng)，可能與胰腺癌神經(jīng)浸潤發(fā)生相關(guān)；NO上調(diào)侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)水平可能是改變胰腺癌細(xì)胞侵襲