A型行為外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路變化與動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病關(guān)系的研究.pdf

1、目的:雖然A型行為作為易罹患心血管疾病的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素已經(jīng)被認(rèn)同,但對(duì)于具有A型行為人格特質(zhì)的心血管病人來說,在慢性和急性應(yīng)激事件的疊加誘導(dǎo)下,導(dǎo)致動(dòng)脈硬化、血栓形成的炎癥機(jī)制的研究還是不充分的。本研究分為三個(gè)層面進(jìn)行:一、探討健康個(gè)體不同行為類型組(A,B,中間)的先天固有免疫系統(tǒng)TLR4/NF-κB/IL-6及IL-18信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活程度的差異,及與血清兒茶酚胺、A型行為程度的關(guān)系;二、探討A型行為交感神經(jīng)活化與外周血單核細(xì)胞TLR

2、4信號(hào)通路激活關(guān)系的可能機(jī)制;三、通過臨床研究,以頸動(dòng)脈硬化和急性冠脈綜合征患者為對(duì)象,進(jìn)一步驗(yàn)證A型行為者單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路持續(xù)激活與頸動(dòng)脈硬化及ACS的關(guān)系。
　　 對(duì)象:隨機(jī)抽取09級(jí)某海軍院校男生476人,大連醫(yī)科大學(xué)女生424人,作為第一部分研究(健康人)對(duì)象;從第一部分三種行為被試中隨機(jī)抽出A型8人,B型8人,中間型8人作為第二部分研究對(duì)象;從2009年4月至2010年5月間,連續(xù)收集在大連市體檢中心、解放軍第

3、210醫(yī)院心內(nèi)科、中心醫(yī)院心內(nèi)科門診,接受頸動(dòng)脈超聲檢查符合頸動(dòng)脈硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)者275人,作為頸動(dòng)脈硬化組,同時(shí)收集301名健康對(duì)照組,作為第三部分研究對(duì)象;為了第四部分的研究,在大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院心內(nèi)科,連續(xù)收集了182名急性冠脈綜合征患者,作為ACS組,第四部分的152人穩(wěn)定型冠心病組(SA)來源于大連市體檢中心、解放軍第210醫(yī)院心內(nèi)科、中心醫(yī)院心內(nèi)科門診,此部分的健康對(duì)照同第三部分。
　　 方法:
　　 1)第

4、一部分:使用明尼蘇達(dá)多相人格調(diào)查(MMPI-Ⅱ)問卷中的A型行為分量表(MMPI-2 type A scale)、自制一般情況調(diào)查表進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查;常規(guī)體格和化驗(yàn)室檢查;流式細(xì)胞儀檢測(cè)術(shù)測(cè)定外周血CD14+單核細(xì)胞表面TLR4蛋白的表達(dá);采用ELISA法測(cè)定血清中IL-6、IL-18水平、血清腎上腺素和去甲腎素水平。
　　 2)第二部分:使用方法同上,RT-PCR技術(shù)測(cè)定TLR4mRNA;免疫組化技術(shù)測(cè)定NF-κBP65蛋白表

5、達(dá)。藥物誘導(dǎo):采用分別單獨(dú)使用20、30、40umol/L多巴酚丁胺(β1受體激動(dòng)劑)激動(dòng)、15umol/L阿替洛爾(選擇性β1受體抑制劑)、PKA,PKC,P38MAPK阻滯劑后再用β1受體激動(dòng)劑激動(dòng)、轉(zhuǎn)染TLR4SiRNA后再激動(dòng)等方法。
　　 3)第三部分:使用第一部分的全部方法;另行頸動(dòng)脈超聲檢查。
　　 4)第四部分:使用第一部分的全部方法;另行心肌酶標(biāo)志物檢查、心電圖、超聲心動(dòng)和冠脈造影檢查、ACS病情評(píng)定、

6、出院后隨訪一年等方法。
　　 統(tǒng)計(jì)分析:采用了x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、方差分析(One-way ANOVA)、Person相關(guān)分析、多元線性回歸和Logistic回歸分析等方法。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分
　　 健康青年A型行為者在非應(yīng)激狀態(tài)下血兒茶酚胺、外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路相關(guān)因子:TLR4蛋白表達(dá)、血清IL-6和IL-18濃度顯著高于B型行為和中間型行為,中間型又顯著高于B型行為者;A型行為得

7、分與其血清腎上腺素和去甲腎上腺素水平及外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路激活程度都呈顯著正相關(guān)。
　　 第二部分
　　 β1受體激動(dòng)劑20、30、40umol/L的多巴酚丁胺投用呈劑量依賴性地增加了TLR4蛋白的表達(dá)、NF-κBp65蛋白表達(dá)、血清IL-6、IL-18水平;使用4種阻滯劑后再投送40umol/L,多巴酚丁胺,15umol/L阿替洛爾能完全阻斷多巴酚丁胺誘導(dǎo)的單核細(xì)胞TLR4表達(dá),使用PKA和P38阻滯劑后能顯

8、著阻斷β1受體激動(dòng)劑對(duì)單核細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)上調(diào)作用,但單核細(xì)胞TLR4蛋白仍高于基礎(chǔ)水平。TLR4基因沉默后,再使用β1受體激動(dòng)劑后,NF-κB/IL-6和IL-18通路的激活被有效抑制。
　　 A型行為者的單核細(xì)胞TIR4/NF-κB3/促炎因子信號(hào)通路活化程度無論是基礎(chǔ)水平還是被β1受體激動(dòng)劑后都顯著高于其它行為類型者;轉(zhuǎn)染TLR4SiRNA后使用β1受體激動(dòng)劑,A型行為者的NF-κBp65蛋白表達(dá)及血清IL-6、IL-

9、18水平下降幅度最大,所達(dá)到程度與其它類型比較無顯著差異。
　　 第三、四部分
　　 頸動(dòng)脈硬化患者,其A型行為者的血清兒茶酚胺水平和外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路激活程度都顯著高于中間型和B型行為者;且A型行為得分與血清兒茶酚胺水平和外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路激活程度都顯著正相關(guān);回歸分析發(fā)現(xiàn):A型行為總得分、人格維度得分、敵意維度得分、血清腎上腺素和去甲腎上腺素水平是TLR4蛋白表達(dá)的影響因素;TLR4蛋白表達(dá)、

10、血清IL-6和IL-18水平都是影響頸動(dòng)脈平均IMT水平的因素和罹患頸脈硬化的危險(xiǎn)因素。
　　 急性冠脈綜合征(ACS)患者,在ACS應(yīng)激狀態(tài)下,A型行為者血清兒茶酚胺持續(xù)處于高水平,外周血單核細(xì)胞TLR4信號(hào)通路持續(xù)處于高水平激活狀態(tài);A型行為者的GRACE評(píng)分和Gensini評(píng)分顯著高于B型和中間型行為者;ACS患者的A型行為得分、TLR4信號(hào)通路激活程度和血清兒茶酚胺水平都與GRACE評(píng)分和Gensini評(píng)分顯著正相關(guān);血

11、清兒茶酚胺水平、A型行為總得分、人格維度得分、敵意維度得分進(jìn)入以ACS應(yīng)激期單核細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)為因變量的回歸方程;TLR4蛋白表達(dá)、血清IL-6、IL-18水平分也都進(jìn)入了以Crace評(píng)分和Gensini評(píng)分為因變量的回歸方程;
　　 非應(yīng)激狀態(tài)下,穩(wěn)定型冠心病組與健康對(duì)照組比較,三種行為類型的血清兒茶酚胺水平、TLR4信號(hào)通路激活水平無顯著性差異。
　　 影響ACS1年內(nèi)生存預(yù)后因素分析:Logistic回歸結(jié)果

12、顯示,A型行為得分、人格維度得分、敵意維度得分、血清兒茶酚胺水平、外周血單核細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)、血清IL-6、IL-18水平都進(jìn)入了回歸方程。
　　 結(jié)論:
　　 (1)β1受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)了單核細(xì)胞TLR4/NF-κB/促炎因子信號(hào)通路激活,而且是呈劑量依賴型變化,以40μmol/L多巴酚丁胺誘導(dǎo)激活效果最明顯;
　　 (2)TLR4、β1受體、PKA、p38MAPK介入了β1受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)的單核細(xì)胞TLR4/

13、NF-κB/促炎因子信號(hào)通路的激活;
　　 (3)A型行為者無論是非應(yīng)激還是應(yīng)激狀態(tài)下,是通過體內(nèi)較高的兒茶酚胺水平介導(dǎo)而使外周血單核細(xì)胞TLR4/NF-κB3/促炎因子信號(hào)通路持續(xù)處于激活狀態(tài)的。
　　 (4)A型行為易化了β1受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)的單核細(xì)胞TLR4/NF-κB/促炎因子信號(hào)通路激活;
　　 (5)頸動(dòng)脈硬化臨床研究揭示了同樣的結(jié)果,而且發(fā)現(xiàn)可否患頸動(dòng)脈硬化和頸動(dòng)脈內(nèi)中膜平均厚度的危險(xiǎn)因素的確是與A型