MiR-9及bcl-2、bax在托吡酯治療顳葉癲癇大鼠海馬組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)是在制備鋰-匹羅卡品誘發(fā)癲癇模型的基礎(chǔ)上，探討miR-9是否參與顳葉癲癇的發(fā)生、發(fā)展過程;miR-9是否參與托吡酯(TPM)抑制顳葉癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的過程;TPM是否通過調(diào)節(jié)bcl-2蛋白與bax蛋白的比值來抑制神經(jīng)元的凋亡。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組:健康的成年雌性及雄性SD大鼠，隨機(jī)分為4組:1）正常對(duì)照組(n=20)，2)顳葉癲癇組(n=20)，3) TPM低劑量組(n=20)，

2、4) TPM高劑量組(n=20)。
　　2.癲癇模型的制備及干預(yù):使用鋰-匹羅卡品誘發(fā)癲癇，模型動(dòng)物需達(dá)到Ⅳ級(jí)以上發(fā)作，并持續(xù)50分鐘以上。對(duì)正常對(duì)照組和顳葉癲癇組大鼠每日1次生理鹽水40mg/kg灌胃。對(duì)TPM低劑量組每日1次TPM40mg/kg灌胃。對(duì)TPM高劑量組每日1次80mg/kg灌胃。
　　3.取材及實(shí)驗(yàn)測定:通過芯片分析及實(shí)時(shí)定量PCR測定上述四組大鼠海馬中miR-9的差異性表達(dá);通過蛋白免疫印跡法及免疫組織化

3、學(xué)法測定上述各組海馬組織中bcl-2蛋白與bax蛋白的比值變化;通過HE染色觀察各組大鼠海馬組織中細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果:
　　1.miRNAs芯片分析結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，癲癇組中有12個(gè)miRNAs(miR-207,-204,-466,-511,-2964,-3581,-764,-214,-210,-351,-466，-298)是上調(diào)的，且有28個(gè)miRNAs(miR-9，-101，-136，-872，-154，

4、-153,-382,-362,-377,-337,-380,-218,-219,-31,-383,-499,-33,-34,-376，-300，-19，-592，-186，-488，-598，-30，-582，-708)是下調(diào)的。TPM低劑量及高劑量組中12個(gè)上調(diào)的miRNAs則出現(xiàn)了下調(diào)，28個(gè)下調(diào)的miRNAs則發(fā)生了上調(diào)。其中miR-9是上調(diào)較明顯的miRNAs之一。
　　2.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，miR-9

5、在癲癇組(SE)中下調(diào)明顯(P＜0.05)。與癲癇組(SE)相比，miR-9在TPM高劑量(TH)組明顯上調(diào)(P＜0.05)。其余組間比較均無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.蛋白免疫印跡法結(jié)果:癲癇組的大鼠海馬組織中bax蛋白的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，而TPM治療組中bax蛋白表達(dá)均下降(P＜0.05)，且TPM高劑量組比TPM低劑量組下降的更明顯(P＜0.05)。癲癇組的海馬組織中bcl-2蛋白的表達(dá)明顯低于

6、正常對(duì)照組(P＜0.05)，TPM治療組中bcl-2蛋白表達(dá)均升高，且TPM高劑量組比TPM低劑量組升高的更明顯(P＜0.05)。Bcl-2/bax比值示癲癇組明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.01)，與癲癇組相比，TPM治療組中bcl-2/bax比值均升高，且TPM高劑量組比TPM低劑量組升高的更明顯(P＜0.01)。
　　4.免疫組化結(jié)果:癲癇組中bax+蛋白表達(dá)明顯多于正常對(duì)照組(P＜0.01);TPM治療組的bax+蛋白表達(dá)與癲

7、癇組相比減少明顯，其中TPM高劑量組較TPM低劑量組減少更為明顯(P＜0.05)。癲癇組中bcl-2+表達(dá)略低于正常對(duì)照組(P＞0.05);TPM治療組中的bcl-2+蛋白表達(dá)與癲癇組相比明顯升高(P＜0.01);TPM低劑量組與TPM高劑量組之間比較差異不明顯(P＞0.05)。正常對(duì)照組與癲癇組相比bcl-2+/bax+比值明顯升高(P＜0.01);TPM治療組與癲癇組相比bcl-2+/bax+比值均明顯升高(P＜0.05);TPM高

8、劑量組與TPM低劑量組相比較bcl-2+/bax+明顯升高(P＜0.05)。
　　5.HE染色結(jié)果:正常對(duì)照組中可見細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，排列整齊緊密;相反，大鼠海馬組織癲癇組、TPM治療組均可見海馬CA3區(qū)大錐體細(xì)胞、DG區(qū)顆粒細(xì)胞及CA1區(qū)小錐體細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)整，間隙明顯增大，排列紊亂，部分細(xì)胞核消失;癲癇組較TPM治療組明顯加重;治療組中TL組較TH組細(xì)胞數(shù)量有所增加，細(xì)胞排列情況及數(shù)量有所改善。