MiRNA和miR-146a在托吡酯治療顳葉癲癇的臨床意義.pdf

1、研究背景：癲癇是一種常見的神經(jīng)失調(diào)癥，并以反復(fù)自發(fā)異常的神經(jīng)元放電為主要特點(diǎn)，目前抗癲癇藥物的使用是治療顳葉癲癇最重要的手段，托吡酯（TPM）則是其中最有效的抗癲癇藥物之一，然而TPM治療癲癇的具體機(jī)制尚未明確。MicroRNAs(miRNAs)一種非編碼單鏈小分子 RNA，近幾年的研究表明它不僅對(duì)神經(jīng)發(fā)育產(chǎn)生影響，還有研究表明它會(huì)參與到癲癇的發(fā)生發(fā)展中，但是其具體機(jī)制尚不明確。結(jié)合國(guó)內(nèi)外的許多研究并未發(fā)現(xiàn)miRNAs與TPM治療癲癇機(jī)

2、制的相關(guān)論文，這為明確癲癇發(fā)病機(jī)制和TPM治療癲癇的機(jī)制提供了基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討 microRNAs（miRNAs）在顳葉癲癇中的表達(dá)譜改變，并通過鋰-匹羅卡品顳葉癲癇大鼠模型制備，闡述TPM對(duì)于癲癇大鼠海馬凋亡的影響和機(jī)制。
　　材料和方法：將大鼠隨機(jī)分為四組：1）正常對(duì)照組，2）顳葉癲癇組，3）TPM低劑量組(40 mg/kg)，4）TPM高劑量組(80 mg/kg)。通過基因芯片分析技術(shù)測(cè)定miRNAs在上述四組中的表達(dá)譜

3、改變，H&E染色觀察各組大鼠海馬組織與細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，并利用免疫蛋白印跡，免疫組化以及免疫熒光等方法測(cè)定上述各組海馬中 caspase-8蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，TLE大鼠海馬中檢測(cè)到了12個(gè)上調(diào)的miRNAs(miR-146a,-183,-204,-210,-339,-34b,351,-429,-455,466b,-503，and-532)和15個(gè)下調(diào)的miRNAs(miR-34a,-383,-451,-10

4、1a,-488,-499,-300,-551b,-380,-592,-598,-741,-7b,-374，and-9)。在使用TPM治療后，12個(gè)上調(diào)的miRNAs發(fā)生了下調(diào)，15個(gè)下調(diào)的miRNAs則出現(xiàn)了上調(diào)。miR-146a是上調(diào)的miRNAs中變化最明顯的。這一結(jié)果闡明，TPM能夠通過主要下調(diào)miR-146a的表達(dá)治療癲癇。另外，在TLE大鼠海馬中可以檢測(cè)到caspase-8的表達(dá)水平明顯增加，但是經(jīng)TPM治療后，其表達(dá)水平下降

5、，證實(shí)了TPM能夠通過下調(diào)caspase-8的表達(dá)抑制TLE大鼠海馬細(xì)胞的凋亡，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，低劑量TPM處理組中大鼠海馬caspase-8的表達(dá)較高劑量TPM處理組更低，表明低劑量TPM的對(duì)大鼠癲癇的療效比高劑量TPM更好。通過對(duì)大鼠海馬組織上述各組的免疫組化、免疫熒光和 H&E染色結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，癲癇大鼠的海馬中 DG區(qū)的損傷最為嚴(yán)重，其次為 CA3區(qū)，但是經(jīng)過治療后，其死亡的神經(jīng)元細(xì)胞明顯減少，證實(shí)了TPM的療效顯著，且TPM低劑量的