顳葉癲癇大鼠海馬Rnd1 mRNA及蛋白表達(dá)的動態(tài)變化研究.pdf

1、本文動態(tài)觀察小分子GTP酶Rho家族的Rnd1 mRNA及其蛋白在氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠模型海馬齒狀回門區(qū)、CA1區(qū)及CA3區(qū)中的表達(dá)變化，探討其在顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展中的作用。文中選用健康的雄性SD成年大鼠124只，隨機分為正常對照組及癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后8h、24h、3d、7d、15d、30d、60d組。腹腔注射氯化鋰(LiCI)及匹羅卡品(PILO)制備顳葉癲癇模型。SE誘導(dǎo)成功后每天定時觀察動物的行為活動及自發(fā)發(fā)作情況，并于8h

2、(急性期)、7d(靜止期)、60d(慢性期)進(jìn)行腦電圖(EEG-)記錄，進(jìn)一步驗證模型制作情況。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測SE后各時間點海馬內(nèi)Rnd1 mRNA的表達(dá)變化，并用免疫組織化學(xué)染色法檢測齒狀回門區(qū)、CA1區(qū)及CA3區(qū)中該蛋白在各時間點的表達(dá)變化情況。 1．動物模型：模型組動物經(jīng)藥物腹腔注射誘導(dǎo)發(fā)作達(dá)RaccineⅣ級以上，并持續(xù)1min后，即進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)，維持60min左右給予10﹪水合氯醛

3、終止發(fā)作，急性期持續(xù)時間為24～48h。存活的大鼠經(jīng)過18～28天的靜止期后進(jìn)入慢性期，表現(xiàn)出自發(fā)性反復(fù)發(fā)作。急性期及慢性期大鼠EEG檢查示癲癇樣異常放電。SE誘發(fā)成功率為88.4﹪，模型成功率達(dá)68.8﹪，總死亡率為19.6﹪。 2．RT-PCR比較對照組和各模型組Rnd1 mRNA/β-actin mRNA的光密度比值發(fā)現(xiàn)，氯化鋰-匹羅卡品致癇大鼠海馬于SE后8h內(nèi)即出現(xiàn)Rnd1表達(dá)上調(diào)，SE后約1d達(dá)高峰，7d左右回復(fù)至對

4、照組水平，此后其mRNA表達(dá)水平與對照組相似。 3．免疫組化：免疫組化染色發(fā)現(xiàn)Rnd1的免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈棕褐色，在海馬內(nèi)廣泛表達(dá)，以齒狀回門區(qū)及CA1區(qū)為著。其中，Rnd1蛋白表達(dá)從SE后8h內(nèi)即開始上調(diào)，約3d達(dá)高峰，至7d雖略有回落，但仍高于對照組水平，且這種情況可一直持續(xù)至慢性期。而在慢性期時CA1區(qū)又再次出現(xiàn)Rnd1蛋白表達(dá)的上調(diào)。 文中通過研究得出結(jié)論：急性期海馬齒狀回門區(qū)Rnd1表達(dá)的上調(diào)，可能通過促進(jìn)MFS的