PLIM在細(xì)胞多重標(biāo)記和活性物種檢測(cè)方面的應(yīng)用.pdf

1、基于熒光強(qiáng)度的熒光顯微成像容易受激發(fā)光功率、樣品光漂白和熒光染料的濃度分布等因素的影響，因此難以做到定量測(cè)量。熒光壽命一般來(lái)說(shuō)不受激發(fā)光強(qiáng)度、熒光團(tuán)濃度和光漂白等因素的影響，僅與熒光團(tuán)所處的微環(huán)境密切相關(guān)。因此發(fā)光壽命成像（PLIM）成為一種新的成像手段來(lái)彌補(bǔ)熒光顯微成像的不足。在生物學(xué)的研究中常用到的染料，它們的熒光光譜有時(shí)非常類似，難以通過(guò)分析其熒光光譜將它們區(qū)分，但它們的熒光壽命一般不同，本論文利用PLIM技術(shù)解決上述生物學(xué)研究上

2、的困擾。同時(shí)，本論文利用PLIM技術(shù)對(duì)細(xì)胞內(nèi)兩種活性物種進(jìn)行檢測(cè)。
　　1．本文利用多種細(xì)胞染料對(duì)細(xì)胞膜、線粒體、細(xì)胞核同時(shí)進(jìn)行標(biāo)記，用共聚焦熒光顯微鏡成像和PLIM成像得出：共聚焦熒光成像能將發(fā)光光譜相差較大的不同染料區(qū)分開(kāi)，當(dāng)幾種染料發(fā)光光譜重疊時(shí)，PLIM技術(shù)利用染料發(fā)射壽命的不同，也可以有效地將其逐一區(qū)分。
　　2．正常的RAW細(xì)胞內(nèi)次氯酸的含量很少，當(dāng)利用LPS和PMA刺激RAW細(xì)胞時(shí)它會(huì)產(chǎn)生一系列炎癥反應(yīng)從而內(nèi)源