IV型膠原酶門脈灌注對四氯化碳誘導兔肝硬化影響的實驗研究.pdf

1、目的:應用四氯化碳(CCl4)皮下注射方法,建立兔肝硬化動物模型。觀察Ⅳ型膠原酶門脈灌注對肝硬化程度的影響,并檢測肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α—SMA)表達與血清基質金屬蛋白酶組織抑制物-1(TIMP-1)變化,了解對于肝星狀細胞激活的影響。
　　 方法:雄性新西蘭大白兔隨機分為實驗組和對照組。實驗組臀部皮下注射50％CCl4橄欖油0.23ml/kg,每周2次,對照組注射等量橄欖油。分別于4周、8周、12周末檢測各組兔肝臟功能,

2、12周末進行肝組織活檢檢查組織病理學變化。12周后各組動物均建立門靜脈給藥通路,將已形成肝硬化并門靜脈插管成功的33只兔隨機分為兩組(組1,組2),組1為16只、組2為17只。組1經門靜脈給藥通路注入0.1％Ⅳ型膠原酶1.5ml,組2注入等量0.9％氯化鈉,5次/周,共4周。將造模對照組中門靜脈插管成功的30只兔同樣隨機分為兩組(組3。組4),每組15只,處理方法同前。4周后,將各組動物分別采血檢測血清TIMP-1后處死,留取肝臟組織,

3、觀察其病理學變化,標本固定后,行α—SMA免疫組織化學染色,行積分光密度、面密度分析。
　　 結果:隨時間延長,實驗組免肝臟纖維化程度逐漸加重,血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、γ-谷氨酰轉肽酶(GGT)明顯升高。12周末出現白蛋白/球蛋白比例倒置,可觀察到典型肝硬化病理表現,兔肝組織出現典型的假小葉結構,動物死亡率20％,造模成功率83％。對照組肝臟功能正常,肝臟組織學結構正常。肝硬化動物肝臟α—SMA表達顯著增

4、強:門脈灌注0.1％Ⅳ型膠原酶肝硬化動物肝臟纖維化程度明顯降低,但與對照組相比,實驗組α—SMA積分光密度為8.460±4.238,對照組為4.090±2.506,二者相比有顯著性差異,證明實驗組肝臟α—SMA表達顯著增強,血清TIMP-1為6.752±0.763ng/ml,較對照組6.165±0.072 ng/ml顯著升高(P<0.05)。
　　 結論: CCl4皮下注射可成功地建立兔肝硬化動物模型,該方法成功率高,可用于相關