4-苯基丁酸對四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的影響.pdf

1、目的：
　　在前期實驗建立四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的基礎(chǔ)上，本實驗中予以小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯基丁酸（PBA）干預(yù)，探討PBA對四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)急性肝損傷的影響，研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對肝細胞壞死、凋亡及增殖的影響，并闡明部分機制。
　　方法：
　　將60只成年健康雄性ICR小鼠隨機分為對照組、PBA組、CCl412 h組、CCl424 h組、CCl448 h組、CCl472 h組、PBA+CCl412 h組

2、、PBA+CCl424 h組、PBA+CCl448 h組、PBA+CCl472 h組，每組6只小鼠。對CCl4組及PBA+CCl4組小鼠經(jīng)腹腔注射CCl4（300μl/kg），PBA+CCl4組小鼠在給予CCl4前經(jīng)腹腔注射給予 PBA（400mg/kg）處理。在CCl4處理后相應(yīng)時點采集血液、處死小鼠、采集肝臟組織。檢測小鼠血液中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平，使用蘇木精-伊紅（HE）染色法分析肝臟病理學(xué)改變，免疫組化檢測肝臟增殖細胞核抗

3、原（PCNA）分布，檢測細胞凋亡情況。蛋白質(zhì)印跡法檢測肝臟葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、C/EBP家族同源蛋白（CHOP）、磷酸化真核生物翻譯起始因子2α（p-eIF2α）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、增殖細胞核抗原（PCNA）、磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B（p-akt）及核因子-kappa B p65（NF-κB p65）蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　與對照組比較，CCl4組小鼠肝臟ALT明顯升高。與C

4、Cl4組比較，不同時點的 PBA+CCl4組小鼠肝臟ALT水平有不同程度地降低，其中24 h時點最明顯[ALT：（7423.81±581.75）U/L與（2876.19±179.76）U/L；t=14.984，P<0.01]，而小鼠肝重體重比僅在48 h時點存在明顯差異[（0.072±0.001）與（0.064±0.004）；t=3.915，P<0.01]；病理學(xué)及TUNEL技術(shù)檢測凋亡結(jié)果顯示：在24 h時點肝細胞凋亡最明顯；PBA處

5、理可減輕CCl4引起的肝細胞壞死及凋亡程度；Western blot結(jié)果顯示PBA處理可降低肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白分子（GRP78、p-eIF2α、CHOP、p-JNK）水平（P<0.01）。進一步研究發(fā)現(xiàn)，CCl4處理后48 h及72 h時點肝細胞增殖明顯，肝細胞增殖相關(guān)的p-akt、PCNA及NF-κB p65蛋白水平明顯升高，與CCl4組相比，PBA+CCl4組與肝細胞增殖相關(guān)的p-akt、PCNA及NF-κB p65蛋白水平明顯