內質網應激介導的細胞凋亡在四氯化碳致小鼠急性肝損傷中的作用.pdf

1、目的：本研究旨在建立四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷動物模型的基礎上,觀察CCl4引起的急性肝損傷及肝細胞凋亡,研究內質網應激(ERS)在CCl4致急性肝損傷和凋亡中的作用,并進一步探討ERS介導肝細胞凋亡的部分機制。
　　方法：建立CCl4致小鼠急性肝損傷動物模型,觀察CCl4對小鼠肝細胞損傷、壞死和凋亡的影響;研究ERS及ERS介導的細胞凋亡在CCl4致急性肝損傷中的作用,并進一步探討其部分機制。24只成年健康雄性ICR小

2、鼠經腹腔注射10％CCl4(300μl·kg-1),于CCl4處理后不同時點(0、2、6、12、24和72 h)眼球取血后剖殺小鼠。采集小鼠血清,檢測血清丙氨酸轉氨酶(ALT)活性;取小鼠肝臟、稱量肝臟組織重量、測定臟器系數(shù);HE染色法觀察肝臟組織病理學改變;TUNEL技術檢測肝臟細胞凋亡情況;免疫組化檢測肝臟免疫球蛋白結合蛋白 GRP78(GRP78)分布;Western blotting分別檢測肝臟細胞總蛋白和線粒體中蛋白表達水平:

3、總蛋白:p-IRE1α、p-JNK、CHOP、裂解型 Caspase-12和細胞色素 C;線粒體蛋白:Bax。
　　結果：給予CCl4處理后不同時點(0、2、6、12、24和72 h),CCl4對小鼠肝細胞損傷、壞死和凋亡的影響:與對照組相比,CCl4處理組小鼠肝臟重量、肝臟系數(shù)(小鼠肝重/體重)顯著升高,從2 h至72 h逐漸增加;經CCl4處理后肝臟ALT明顯升高,以24 h升高最顯著,之后明顯減弱;病理組織學結果顯示,CCl

4、4處理引起肝細胞凋亡和壞死,以CCl4處理后24 h損傷最明顯;Western blotting顯示,經CCl4處理后肝臟細胞線粒體中促凋亡蛋白Bax表達水平增加,同時肝細胞胞漿內細胞色素C的釋放明顯增多。為進一步研究ERS在CCl4致急性肝細胞凋亡的作用,檢測了CCl4處理組后小鼠肝臟ERS相關蛋白表達。免疫組化結果顯示,CCl4處理組小鼠肝臟GRP78蛋白表達顯著升高;Western blotting顯示,肝臟p-IRE1α、p-J