內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在四氯化碳致小鼠急性肝損傷中的作用.pdf

1、目的：本研究旨在建立四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,觀察CCl4引起的急性肝損傷及肝細(xì)胞凋亡,研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)在CCl4致急性肝損傷和凋亡中的作用,并進(jìn)一步探討ERS介導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的部分機(jī)制。
　　方法：建立CCl4致小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型,觀察CCl4對(duì)小鼠肝細(xì)胞損傷、壞死和凋亡的影響;研究ERS及ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在CCl4致急性肝損傷中的作用,并進(jìn)一步探討其部分機(jī)制。24只成年健康雄性ICR小

2、鼠經(jīng)腹腔注射10％CCl4(300μl·kg-1),于CCl4處理后不同時(shí)點(diǎn)(0、2、6、12、24和72 h)眼球取血后剖殺小鼠。采集小鼠血清,檢測(cè)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性;取小鼠肝臟、稱量肝臟組織重量、測(cè)定臟器系數(shù);HE染色法觀察肝臟組織病理學(xué)改變;TUNEL技術(shù)檢測(cè)肝臟細(xì)胞凋亡情況;免疫組化檢測(cè)肝臟免疫球蛋白結(jié)合蛋白 GRP78(GRP78)分布;Western blotting分別檢測(cè)肝臟細(xì)胞總蛋白和線粒體中蛋白表達(dá)水平:

3、總蛋白:p-IRE1α、p-JNK、CHOP、裂解型 Caspase-12和細(xì)胞色素 C;線粒體蛋白:Bax。
　　結(jié)果：給予CCl4處理后不同時(shí)點(diǎn)(0、2、6、12、24和72 h),CCl4對(duì)小鼠肝細(xì)胞損傷、壞死和凋亡的影響:與對(duì)照組相比,CCl4處理組小鼠肝臟重量、肝臟系數(shù)(小鼠肝重/體重)顯著升高,從2 h至72 h逐漸增加;經(jīng)CCl4處理后肝臟ALT明顯升高,以24 h升高最顯著,之后明顯減弱;病理組織學(xué)結(jié)果顯示,CCl

4、4處理引起肝細(xì)胞凋亡和壞死,以CCl4處理后24 h損傷最明顯;Western blotting顯示,經(jīng)CCl4處理后肝臟細(xì)胞線粒體中促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平增加,同時(shí)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C的釋放明顯增多。為進(jìn)一步研究ERS在CCl4致急性肝細(xì)胞凋亡的作用,檢測(cè)了CCl4處理組后小鼠肝臟ERS相關(guān)蛋白表達(dá)。免疫組化結(jié)果顯示,CCl4處理組小鼠肝臟GRP78蛋白表達(dá)顯著升高;Western blotting顯示,肝臟p-IRE1α、p-J