細(xì)胞色素P450的原核表達(dá)及應(yīng)用于內(nèi)分泌干擾物雙酚A的檢測(cè).pdf

1、細(xì)胞色素P450是包含一個(gè)血紅素蛋白的超大家族，它被發(fā)現(xiàn)存在于所有的生物有機(jī)體中：從細(xì)菌、酵母、真菌、植物、動(dòng)物以至于人體，這個(gè)酶引人注目的特點(diǎn)是能夠催化廣泛的有機(jī)化合物的反應(yīng)，能使有害物質(zhì)轉(zhuǎn)變成為可溶物從體內(nèi)排出。因此它在各種生物合成和生物降解中起著重要的作用。
　　 本論文對(duì)人細(xì)胞色素P4501A2、P4502C9、P4502C19、P4502D6、P4503A4五種人細(xì)胞色素P450和NADPH-細(xì)胞色素P450還原酶的在

2、大腸桿菌中共表達(dá)，表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行了初步的分離，獲得膜蛋白，P450表達(dá)水平每升細(xì)胞培養(yǎng)物從3.8到38.7 nmol不盡相同，而還原酶的表達(dá)水平每升細(xì)胞培養(yǎng)物從8.37到33.9 U大小不等，并以雙酚A為底物研究了它們的酶活性。
　　 利用原核表達(dá)獲得CYP2C9和NADPH-細(xì)胞色素P450還原酶，利用聚丙烯酰胺固定CYP2C9酶于熱裂解石墨電極表面，構(gòu)建相應(yīng)的生物傳感器，實(shí)現(xiàn)了CYP2C9的直接電化學(xué)，并且研究了CYP2C

3、9的直接電化學(xué)行為，進(jìn)一步應(yīng)用于其相應(yīng)底物雙酚A的催化氧化研究和分析檢測(cè)。
　　 制備一種納米羥基磷灰石修飾碳糊電極(Nano-HAP-CPE)，并建立了一種靈敏、簡(jiǎn)便的檢測(cè)雙酚 A的電化學(xué)分析方法。通過循環(huán)伏安法（CV）、計(jì)時(shí)庫(kù)侖法(CC)、線性性掃描法 (LSV)和差分脈沖伏安法（DPV）等方法研究了BPA在Nano-HAP-CPE電極上的電化學(xué)行為，得到電化學(xué)動(dòng)力學(xué)參數(shù)并優(yōu)化檢測(cè)條件。結(jié)果表明：Nano-HAP-CPE電極